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枫香（Liquidambar formosana Hance.）系金缕梅科（Hamamelidaceae）枫香属落叶乔木，分布于秦岭淮河以南地区，跨北热带和南、中、北亚热带等4个气候带，是我国重要的乡土阔叶速生树种，集观赏、药用和材用等多种价值于一身。近年来对枫香的研究主要集中在无性繁殖技术、人工林和混交林技术、叶片的叶色分析、种子生物学特性、枫香树林的生理生化研究及园林应用等方面，而对其分子水平的遗传多样性研究较少，本研究将SRAP这种新的DNA分子标记运用到枫香的遗传多样性研究上，以期为枫香不同居群的遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图谱构建和分子育种等领域研究提供参考 本试验以浙江省7个枫香群体（杭州市淳安县、杭州市桐庐县、丽水市莲都区、温州市文成县、衢州市开化县、台州市天台县、舟山市定海区）的叶片为材料，通过对不同的DNA提取方法对比，探讨最优的枫香基因组DNA提取方法;同时对枫香基因组SRAP技术体系进行优化，并将该体系应用于SRAP扩增分析中，研究各群体间的遗传多样性。本试验具体研究结论如下: 1.枫香基因组DNA提取方法优化 本试验采用改良CTAB法和试剂盒法(Bioteke公司研发的)两种方法对枫香叶片DNA提取结果进行对比，发现两种方法提取的枫香嫩叶DNA在含量和纯度上相差不大，均能满足后续PCR扩增要求。而对于老叶，改良CTAB法提取老叶基因组DNA的产率和纯度均较试剂盒法高。后者不仅含量较低，且含有其他杂质，DNA降解较严重，将对下游PCR反应和其他DNA分子操作产生不利影响。使用改良CTAB提取法有效地解决了枫香树基因组DNA提取中的褐变和多酚、多糖和蛋白质等次生物质干扰等问题。从检测所得纯度可知该DNA模板完全可以用于SRAP分析;另外，该方法还具有成本低、操作简单、省时等特点。 2.枫香基因组DNA的SRAP-PCR扩增体系优化 采用L16(45)正交实验设计，对影响SRAP-PCR反应体系的Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量等5个因素进行了优化，确立枫香树SRAP-PCR最佳反应体系为:总体积20ul，含1×PCR Buffer、1.5 mmol·L-1 Mg2+、0.16 mmol·L-1 dNTPs、0.5umol·L-1引物、0.9 UTaq DNA聚合酶和40 ng模板DNA。SRAP-PCR扩增程序为:95℃预变性5 min，94℃变性30 sec，35℃退火1 min，72℃延伸2 min，5次循环;94℃变性30 sec，50℃退火30 sec，72℃延伸1 min，30次循环;72℃延伸10 min，4℃保存。结果显示随机选择的引物对随机选择的基因组DNA均可扩增出多态性丰富且条带清晰的DNA片段。说明该SRAP-PCR反应体系稳定可靠，适用于枫香树基因组DNA的SRAP-PCR扩增反应。 3.枫香树群体的遗传多样性 应用SRAP分子标记的16对引物组合对采自浙江省7个枫香树群体的120个个体样品进行SRAP-PCR分析，共扩增902个条带，其中多态性条带897个，枫香树物种水平上的多态性条带百分率为82.18％，shannon表型多样性指数为0.4935。在群体水平上，多态性条带百分率变化范围为54.29％～74.29％，其均值为66.74％; shannon表型多样性指数的变化范围为0.3199～0.3928，其均值为0.3674。枫香天然群体内和群体间都存在着显著的遗传变异(P＜0.001)，群体间的遗传变异占总变异的15.04％，群体内的遗传变异占总变异的84.96％。 4.枫香树天然群体的遗传距离 由Nei指数计算枫香树群体的遗传相似度和遗传距离，结果表明群体的遗传相似度在0.8999～0.9685之间变化。遗传距离在0.1055～0.0320。其中淳安群体与桐庐群体的遗传距离最小为0.0320，而淳安群体和文成群体的遗传距离最大为0.1055。 5枫香树天然群体的聚类图 根据枫香树种群间的遗传距离，利用UPGMA聚类方法对7个枫香群体进行聚类分析，得出反映各群体间亲缘关系的树状图。可将7个种群分为两大类:第一类中淳安群体和桐庐群体的遗传距离最近，首先聚在一起，再与台州群体聚在一起，最后与生长环境不同的舟山群体聚类;另一类为丽水和文成先聚在一起，再与距离相对较远的开化群体聚在一起。发现枫香树群体的聚类结果与其地理分布格局大致相吻合。