目的本研究以孔鳐鱼为原材料,探究其中硫酸软骨素寡糖的提取、分离及纯化工艺,并对各级产物进行了产率、分子量、抗氧化活性等多方面的对比,响应面法确定稀碱酶法最优工艺条件,为硫酸软骨素寡糖的研究发展提供实验依据。方法先分别用浓碱法、碱盐法以及稀碱法三种不同提取工艺对孔鳐鱼软骨进行硫酸软骨素的提取,之后再通过分析产品得率、氨基己糖和氮杂质的含量来比对三种工艺所得成品的质量区别,以寻找最佳的提取工艺。用响应面法确定稀碱酶法的最佳工艺条件。此后以碱盐法所提取到的硫酸软骨素成品为材料,做进一步的降解、分级分离和纯化,以获得纯度较高的单一组分的硫酸软骨素寡糖。在降解时采用了酶解和酸解两种方式,通过对比降解产物的生物活性来确定酶解产物进入下一级的分离纯化。同时对酶解时间进行了考察,确定5.5h为最佳酶解时间。此后以酶解5.5h的硫酸软骨素寡糖的初级产物为原料,建立分级分离纯化体系。在逐步经过凝胶过滤分离、阴离子交换分离、制备电泳分离和AKTA superdex peptide柱分离后得到组分相对比较单一的高纯度硫酸软骨素寡糖。在这一过程中,对每一级的分离产物都进行分子量和抗氧化活性的检测。用响应面法确定稀碱盐法的最佳工艺条件。结果在三种提取工艺中,碱盐法所提取得到的硫酸软骨素成品B的产品得率最高,氨基己糖含量最高,氮杂质的含量略高于稀碱法所得成品,但纯度并无太大差别。综合考虑,碱盐法为硫酸软骨素提取的最佳工艺。孔鳐鱼硫酸软骨素酶解产物X和酸解产物Y的分子量和所含组分差别不大,但X的抗氧化活性优于Y,且颜色上也是X的乳白色优于Y的深棕色,在孔鳐鱼硫酸软骨素的降解工艺选择上应该以酶解为主,并且酶解的时间控制在5.5h最佳。酶解产物经初步的凝胶过滤分离后可得到L1和L2两种复杂的硫酸软骨素寡糖组分,L2的抗氧化活性高于L1,而重均分子量低于L1。选取L2组分进行进一步的阴离子交换分离后可得到S1、S2、S3三种非单一组分的硫酸软骨素寡糖。但通过对这三者进行进一步的制备电泳分离和AKTA superdex peptide柱分离,便得到了组分较为单一的三种硫酸软骨素寡糖CS-a(536Da)、CS-b(993Da)和CS-c(1357Da),这三种寡糖的抗氧化活性都呈现出一定的量效关系,但三者之间的差异不明显。结论结果显示:经本研究所建立的分级分离体系所纯化得到的硫酸软骨素寡糖有三种,组分较为单一,其抗氧化活性都呈现出一定的量效关系,但三者之间的差异性不明显。响应面分析法得到的结论是:最佳的硫酸软骨素提取条件为氢氧化钠浓度:7.0%,温度:40℃,料液比:5.0。最优的酶解提取条件为:酶解时间:4.3h,温度:44℃,用量:0.46%。