目的：食物中的硝酸盐经由上消化道吸收入血，血液循环后经唾液腺主动分泌到唾液中，致使唾液硝酸盐浓度是血液中5～10倍，但是目前硝酸盐在涎腺组织的分泌机理尚不清楚。本研究拟应用基因芯片、RT-PCR等技术检测植物硝酸盐转运蛋白的同源基因以及电压敏感氯离子通道家族在涎腺组织和细胞的表达情况，旨在筛选涎腺细胞硝酸盐转运体系的候选基因。 方法：1.应用基因芯片检测人正常腮腺、颌下腺基因表达谱，筛选腮腺、颌下腺之间存在的差异基因，然后应用Real-timePCR对部分差异表达基因进行验证，同时观察腮腺、颌下腺表达基因中是否有植物硝酸盐转运蛋白的同源基因。2.应用RT-PCR技术观察正常腮腺、颌下腺、人颌下腺细胞系(HSG)唾液酸转运蛋白(sialin)编码基因SLC17A5(植物硝酸盐转运蛋白同家族基因)表达情况；应用原核表达技术表达sialin多肽融合蛋白后，免疫动物制备抗sialin多克隆抗体，最后应用Westernblot、共聚焦显微镜、免疫组织化学等技术观察sialin在涎腺组织和细胞的表达情况及表达部位。3.应用RT-PCR技术观察涎腺组织和细胞中电压敏感氯离子通道家族(CLCfamily)基因表达情况；利用原核表达技术表达CLCN5多肽融合蛋白，免疫动物制备抗CLCN5多克隆抗体，然后利用Westernblot、共聚焦显微镜、免疫组织化学等技术观察CLCN5、6、7在涎腺组织和细胞的表达情况及表达部位；利用RNAi技术，构建干扰CLCN5基因表达的质粒。 结果：1.基因芯片检测显示腮腺相对于颌下腺有47个基因高表达，颌下腺相对于腮腺有98个基因高表达，其中腮腺高表达组肿瘤相关基因有原癌基因Pleiotrophin、WNT信号传导通路的WNT5A、肿瘤多药耐药相关蛋白ABCC1；颌下腺高表达组在淀粉和糖代谢信号通路上有4个节点上高表达，其中参与O-糖苷键型糖基化有GalNAc-T4、GalNAc-T7、GalNAc-T13，另外一个基因是葡萄糖苷酸(基)转移酶UGT2B28；除此之外腮腺还在有机阴离子转运蛋白SLCO1A2、SLC13A5、内向整流钾通道KCNJ15较颌下腺高表达，而氯离子通道CFTR在颌下腺高表达。通过对腮腺、颌下腺基因表达谱分析发现SLC17A5基因在腮腺、颌下腺均为高表达。Real-timePCR验证了Pleiotrophin、WNT5A、ABCC1、SLCO1A2、SLC13A5、KCNJ15、GalNAc-T13、CFTR等9个基因，结果与基因芯片完全一致，进一步证实了本研究中基因芯片数据的可靠性。2.正常腮腺、颌下腺、HSG细胞均表达SLC17A5基因；获得了唾液酸转运蛋白sialin分子N端1-38个氨基酸cDNA，在原核细胞中成功表达，制备了相应的多克隆抗体；应用抗sialin多克隆抗体检测其在涎腺组织和细胞的表达发现sialin不仅存在于HSG细胞的胞浆内，更重要的是也定位在细胞膜上，而在涎腺组织中sialin主要表达在导管部位。3.电压敏感氯离子通道家族中的CLCN2、3、5、6、7、Ka基因在涎腺组织和HSG细胞中表达；获得了CLCN5分子(78-142)多肽融合蛋白，在原核细胞中成功表达，制备了相应的多克隆抗体；应用抗CLCN5多克隆抗体和商业化CLCN6、7抗体检测三者在涎腺组织和细胞的表达发现CLCN5、6、7不仅存在于HSG细胞的胞浆内，而且也存在细胞膜上，在涎腺组织中主要位于导管部位；成功构建了干扰CLCN5基因表达的质粒。 结论：1.本研究应用基因芯片技术首次高通量研究了正常个体腮腺、颌下腺基因表达差异，建立了正常腮腺、颌下腺的总体基因差异表达图谱。2.腮腺高表达的肿瘤相关基因可能与腮腺肿瘤的发病高于颌下腺有关；腮腺、颌下腺差异表达基因中有离子转运相关基因，说明腮腺、颌下腺在部分离子的转运上存在差异；颌下腺高表达粘蛋白基因及其合成相关基因是颌下腺分泌粘蛋白，而腮腺没有粘蛋白的基因基础。3.本研究首次发现sialin、CLCN5、CLCN6和CLCN7在涎腺组织和细胞表达，并且存在于HSG细胞的细胞膜上，认为可能是涎腺转运硝酸盐高度相关的候选基因，尚待进一步研究验证。