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目的:探讨口腔粘膜癌前病变及口腔鳞癌组织中染色体9p2个微卫星位点D9S1752,D9S171的变化情况。
材料和方法:标本取自南京大学附属口腔医院临床活检及手术切除病变组织,其中口腔粘膜白斑16例,红斑5例,口腔鳞癌10例,均经病理证实,并取外周血作为对照组。提取病变组织及外周血细胞DNA,PCR反应体系中加入目的基因与参考基因两对引物进行PCR扩增,目的基因引物为D9S1752、D9S171,参考基因引物为hMSH2外显子13。对PCR反应产物进行变性高效液相色谱分析(Denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)(D9S1752)及凝胶电泳带Genetoolsanalysissoftware分析(D9S171)。
结果:在D9S1752位点,口腔粘膜白斑组LOH与MSI的发生率分别为18.8%、12.5%,红斑组未出现LOH,MSI的发生率为20.0%,鳞癌组LOH与MSI的发生率分别为20.0%、30.0%;按病理分级,轻度上皮异常增生组的LOH发生率为25.0%,未见MSI,中度上皮异常增生的LOH发生率为20.0%,MSI发生率为10.0%,重度上皮异常增生的LOH发生率为14.3%,MSI发生率为28.6%,鳞癌的LOH发生率为20.0%、MSI发生率为30.0%。D9S171位点上,口腔粘膜白斑组LOH与MSI的发生率分别为18.8%、25.0%,红斑组LOH的发生率为20.0%,MSI未见发生,鳞癌组LOH与MSI的发生率分别为10.0%、40.0%;轻度上皮异常增生组的LOH发生率为0,MSI的发生率为25.0%,中度上皮异常增生的LOH发生率为10.0%,MSI发生率为20.0%,重度上皮异常增生的LOH发生率为28.6%,MSI发生率为14.3%,鳞癌的LOH发生率为10.0%、MSI的发生率为40.0%。不同临床诊断及病理学分型之间的单个位点LOH、MSI检出率经统计学检验无显著性差异(P>0.05),但综合两个位点的微卫星改变检出率,EP与SCC之间差异显著(P<0.05),LD与SCC,MD与SCC之间差异显著(P<0.05)。
结论:D9S1752、D9S171两个位点LOH、MSI分析研究结果表明,口腔癌前病变已出现微卫星改变,病损早期D9S1752位点高频率的LOH预示其为癌变的早期事件,可能发生在口腔癌前病变癌变的启动阶段,D9S1752位点的MSI及D9S171位点的微卫星改变发生于口腔癌前病变癌变的整个过程,反映了口腔癌前病变癌变的发展过程。提示D9S1752、D9S171位点上可能存在与口腔癌发生发展有关的候选抑癌基因,可望成为辅助形态学诊断的生物学指标。