本研究使用碳二亚胺法(EDC)和生理学法(青霉素化反应)两种偶联方法将青霉素G与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成2种免疫抗原PEN-EDC-BSA、PEN-BSA,2种检测抗原PEN-EDC-OVA、PEN-OVA,经SDS-PAGE实验证明青霉素G与载体蛋白偶联成功,通过测定载体蛋白、青霉素G以及合成抗原280nm和260nm处的OD值,计算出合成抗原PEN-EDC-BSA、PEN-EDC-OVA、PEN-BSA、PEN-OVA中青霉素G与载体蛋白的结合比分别为12:1、16:1、6:1、7:1。实验兔子分为E、S两组,分别用PEN-EDC-BSA、PEN-BSA免疫,制备抗血清,利用间接ELISA法测定抗血清效价,E组效价在1:1600-1:12800之间,S组效价在1:102400-1:204900之间。应用辛酸-硫酸铵法提纯IgG,测定提纯后IgG溶液浓度在27.42-18.15mg/ml之间,且其效价基本上无改变,综合IgG溶液的浓度和效价两个指标,筛选出最佳IgG溶液为S3、S4,其浓度与效价分别为23.97、24.27mg/ml和1:102400、1:204900。将SPA稳定液与不同浓度的IgG混合,制备SPA工作液,再与检测抗原反应,筛选出SPA菌稳定液和IgG最佳比例为2:1,最佳菌体工作浓度为2%。应用SPA-COA快速检测牛奶中抗生素残留的检测限度为10μg/L。