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目的:慢性炎症能够导致胰岛β细胞损伤,诱导胰岛素分泌降低,同时干扰胰岛素信号传导,诱导胰岛素抵抗的发生,在2型糖尿病(T2DM)的发生发展中具有重要作用。枸杞多糖(LBP)是枸杞提取物的主要活性成分之一。已有研究表明LBP除了具有降糖作用外,还可以降低T2DM患者体内的炎症因子水平,但是其抑炎降糖的作用机制还不清楚。本课题研究了My D88非依赖性途径(又称TRIF/TRAM途径)在LBP影响T2DM炎症因子生成过程中的作用,以探讨LBP抑炎降糖的机制。方法:利用水煮醇沉法获取LBP,并对其进行表征。采用高脂饲料喂养My D88-/-小鼠(40只),链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)低剂量(80mg/kg)腹腔注射建立T2DM模型。将成模后的My D88-/-小鼠随机分为模型组、二甲双胍组(40mg/kg)以及低、中、高LBP组(20、40、80mg/kg),进行为期3个月的干预。另取8只My D88-/-小鼠为正常对照组。干预过程中记录所有小鼠的体重和血糖的变化。干预结束后,ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)、转化生长因子β1(TGF-β1)及IL-10的水平。RT-PCR及Western blot分别测定小鼠腹腔巨噬细胞中My D88非依赖性途径(TRIF/TRAM途径)中的关键接头分子TRAM、TRIF、RIP1、TRAF6的基因和蛋白表达量。结果:1.苯酚-硫酸法检测发现LBP中的多糖含量为77.38%;高效凝胶色谱法对多糖的分子量进行测定发现LBP中大于10k Da的多糖占总多糖的93.06%;傅里叶变化红外光谱和紫外光谱扫描法对LBP进行定性分析发现,样品中有典型的多糖结构并在280nm处出现最大吸收峰。同时气相色谱-质谱联用分析显示,LBP的组成成分为阿拉伯糖0.31%;木糖0.16%;甘露糖41.68%;鼠李糖3.46%;葡萄糖53.83%;半乳糖0.56%。2.LBP对My D88-/-T2DM小鼠干预3个月后,小鼠的体重及血糖在干预前后无明显变化。ELISA法检测各炎症因子水平发现,与正常对照组相比,模型组小鼠的IL-8、TGF-β1和IL-10水平明显升高;给予LBP干预3个月后,低、中剂量组小鼠的血清IL-1β和TGF-β1水平较模型组、正常对照组明显降低;低LBP组IL-10水平高于正常对照组。进一步采用RT-PCR检测My D88非依赖性途径(TRIF/TRAM途径)中关键因子的基因水平,结果发现模型组小鼠的TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1基因表达明显升高;LBP干预后,各组TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1基因表达较模型组均受到不同程度的抑制。但是Western blot检测显示,除高LBP组的TRIF、RIP1、TRAM蛋白外,各干预组的蛋白表达与正常对照组、模型组相比均无统计学差异。结论:综合以上结果,尚不能证明LBP能够通过TLR/NF-κB通路中的My D88非依赖性途径,发挥抑制炎症因子水平及降低血糖的作用。