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β-半乳糖苷酶（EC 3.2.1.23）俗称乳糖酶,因能水解β-1,4-半乳糖苷键而具有重要的工业用途。耐热β-半乳糖苷酶,以其良好的热稳定性和较高温度下的水解特性使之具有常温乳糖酶无法比拟的优越性。本文主要研究来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热β-半乳糖苷酶基因在枯草芽孢杆菌系统中的表达。将β-半乳糖苷酶bgaB基因克隆到含有启动子P43的表达载体pZ01中,构建重组菌株WB600/pZ01-bgaB,所表达的重组酶活力达到24U/mL,SDS-PAGE电泳显示有明显的重组表达产物,分子量大小为70kDa。WB600/pZ01-bgaB在无抗生素选择压力下,连续传代10次,酶活保留79.6%。WB600/pZ01-bgaB所表达的重组酶在65℃保温4h,酶活保留80%。用PCR方法从Bacillus. stearothermophilis染色体DNA扩增bgaB基因启动子,构建重组质粒pMK4-bgaB2,转化BD170获得重组菌株BD170/ pMK4-bgaB2。SDS-PAGE电泳分析显示BD170/ pMK4-bgaB2有明显的蛋白质表达,说明嗜热脂肪芽孢杆菌来源的启动子在枯草杆菌中是适用的。将pMK4-bgaB2中的bgaB启动子取代载体pZ01-bgaB的启动子P43,转化WB600获得重组菌株WB600/pF01-bgaB,与重组菌株WB600/pZ01-bgaB、WB600/pMA5-bgaB（HpaII启动子）的表达量相比较,说明bgaB基因启动子效率不及枯草杆菌来源的启动子。将bgaB基因分别插入到带有青霉素酰化酶pga信号肽的分泌载体pZP01和带有淀粉酶信号肽的载体pUH中,转化并获得重组菌株WB600/pZP01-bgaB和WB600/pUH-bgaB。WB600/pZP01-bgaB培养18h ,胞外乳糖酶的酶活相当于胞内酶活的8.3 % ,WB600/pUH-bgaB在木糖诱导下培养18h,胞外乳糖酶的酶活相当于胞内酶活的4.0%,说明仅仅采用分泌信号引导,可能难以实现bgaB基因在枯草芽孢杆菌体系中的分泌表达。