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目的:随着老龄化社会的来临,骨质疏松症已逐渐成为公共卫生的挑战。骨形成障碍以及破骨活动的增加是骨质疏松的主要发病机制。许多研究发现,多种Micro RNA(mi RNA)可以通过调节各种蛋白的表达来影响骨代谢。然而,mi R-532-3p对骨代谢的影响还没有被报道。因此,本研究利用MC3T3-E1成骨前体细胞系探讨了mi R-532-3p对成骨细胞增殖,分化的影响及机制。方法:根据骨质疏松诊断标准,选取绝经后骨质疏松患者(20例)与绝经后非骨质疏松患者(20例)。通过Real-time q PCR测得患者棘突骨质中mi R-532-3p及ETS1的表达水平。卵巢切除术被用于构建绝经后骨质疏松大鼠模型(PORM),根据是否行卵巢切除将大鼠分为卵巢切除术组与假手术组。3月后,利用Micro-CT测定大鼠离体左侧股骨的骨密度,骨体积,骨小梁数量,骨小梁厚度以及骨小梁数量等参数,判断PORM的构建成功与否。Real-time q PCR及Western Blotting被用于测定大鼠右侧股骨及成骨诱导的MC3T3-E1细胞中mi R-532-3p及ETS1的含量。利用mi R-532-3p mimic及inhibitor改变MC3T3-E1细胞中mi R-532-3p的水平。在转染后24小时后,采用MTT实验检测mi R-532-3p水平的变化对MC3T3-E1细胞的增殖的影响。在转染并诱导7天后,Real-time q PCR及Western Blotting检测各组细胞中成骨标志物的表达水平,碱性磷酸酶染色(APS)观察mi R-532-3p对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性的影响。在转染并诱导35天后,茜素红染色(ARS)观察mi R-532-3p对MC3T3-E1细胞矿化能力的影响。Mi RNA靶基因预测数据库被用于预测mi R-532-3p的靶基因,并加以双荧光素酶报告基因检验mi R-532-3p与靶基因的结合及初步探究其对靶基因表达的调节。随后,通过转染慢病毒载体在MC3T3-E1细胞中过表达靶基因,通过Real-time q PCR,Western Blotting,APS及ARS确定靶基因的过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响并验证靶基因是否参与mi R-532-3p调控的成骨分化。结果:MiR-532-3p在低BMD的患者棘突及大鼠股骨中升高。随着MC3T3-E1细胞成骨诱导时间增加,mi R-532-3p的含量逐渐降低。MTT实验结果提示mi R-532-3p mimic可以抑制MC3T3-E1细胞的增殖。Real-time q PCR与Western Blotting结果提示mi R-532-3p mimic可以抑制Ⅰ型胶原蛋白(Col1A1)、Runt相关转录因子-2(Runx2)、ALP、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OCN)基因的表达。APS及ARS结果显示mi R-532-3p mimic可以抑制MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性与钙结节的形成。通过靶基因预测数据库与双荧光素酶报告基因分析发现mi R-532-3p可以通过与ETS1 m RNA的3’端非翻译区(3’UTR)315-321位点结合并抑制其蛋白翻译。并且发现,ETS1在低BMD的患者棘突及大鼠股骨中表达降低。另外,随着MC3T3-E1细胞成骨诱导时间增加,ETS1 m RNA及蛋白的含量呈时间依耐性上升。为阐明ETS1在成骨分化过程中的作用,通过过表达ETS1慢病毒载体(Lenti-ETS1)上调MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的ETS1水平。结果发现Lenti-ETS1可以促进成骨相关基因(Col1A1、Runx2、ALP、OPN和OCN)m RNA与蛋白的表达,ALP活性及钙结节的形成。共转染Lenti-ETS1与mi R-532-3p mimic并成骨诱导后发现,相较于单独转染Lenti-ETS1,多种成骨相关基因表达降低,ALP活性及矿化能力下降。另外,这些成骨相关基因的表达,ALP活性及矿化能力高于单独转染mi R-532-3p mimic。结果提示,过表达ETS1可以部分逆转mi R-532-3p mimic对成骨分化的抑制作用。结论:miR-532-3p可以通过下调ETS1抑制成骨分化。