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从1949年以来经过近五十年的发展，超低温保存种质细胞技术已经趋于成熟，特别是在家畜推广良种化的过程中发挥重要作用。对海洋动物种质细胞保存研究的范围主要集中在鲑鳟鱼类和牡蛎等少数几种海洋生物上。本研究结合“国家自然科学基金”研究项目，进行了三种贝类和两种鱼类精子的超低温保存实验，得到了它们在液氮（－196℃）条件下的适宜保存条件。 栉孔扇贝（Chlamys farreri）冻精解冻后复苏比例、受精率和孵化率最高可达到49.39％、42.06％和12.15％。栉孔扇贝精子超低温保存时发生冷冻伤害的温度范围在－30℃～－60℃；其低温保存的最适降温速率为20℃/min；使用抗冻剂二甲基亚砜（DMSO）的最适浓度为5％，其保存效果优于甘油；样品保存的最佳体积为0.6ml～1ml；解冻精子的最适水温为35℃，50℃次之，20℃最差；用自然海水激活解冻后精子的效果好于低盐度溶液；在0℃进行预处理平衡时间不宜太长；在抗冻液中加入蛋黄对保存效果没有改善，并且会对冻精的孵化率有抑制作用；用20℃/min和5％DMSO冷冻精子，液氮中保存栉孔扇贝精子55天后其复苏比例达到42.17％。 超低温保存紫贻贝（Mytilus galloprovincialis Lamarck）精子，解冻后其复苏比例、受精率和孵化率最高可达到41.63％、69.52％和54.74％。保存紫贻贝精子最适降温速率为5℃/min，发生冻伤的温度范围是－20℃～－60℃；使用抗冻剂DMSO的保存效果好于甘油，且使用抗冻剂DMSO的最适浓度为15％；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；样品体积（在0.2～1ml之间）对保存效果没有影响；采用15％DMSO和5℃/min的降温速率处理精子，液氮中保存90天后复苏比例仍达到41.8％。 保存菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum (Adams and Reeve)）精子的最适降温速率为5℃/min，发生冻伤的温度范围是－30℃～－60℃；抗冻剂DMSO的保存效果好于甘油，也胜于DMSO与甘油混合使用，使用抗冻剂DMSO的最适浓度为10％；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；样品体积（在0.2～1.6ml之间）对保存效果有显著影响。冷冻保存后精子复苏比例、受精率和孵化率最高达到40.84％、68.87％和47.17％；以最适降温速率和抗冻 李纯 中国科学院海洋研究所硕士学位论文 剂浓度处理精子，并在液氮中保存36天后冻精复苏比例仍可以达到38．54％。 黑蛔warns macrocePhalus）精子经过超低温保存后复苏率、存活率最高可 以达到61．37％和61．4％。保存黑鳃精子时发生冷冻伤害的温度范围是一20C～ 一60C，适宜的降温速率为 20Clndfi：使用抗冻剂 DMSO的适宜浓度为 20％； 样品体积对保存效果有相关性；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH 值的溶液；使用20％DMSO和20Clndn降温速率处理，在液氮中保存黑鳃精 子66天后解冻，其复苏率和存活率分别为59．sl％和58．45％。 在液氮中保存真绸（Pagrosomus major）精子时发生冷冻伤害的温域为一30 OC—一60 C，适宜的降温速率为2 0 C IITiln；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20 ％；采用低盐度或高PH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鳃冻精的 复苏率和存活率最高可达到5073％和62．5％；以20Clndn和20％DMSO处理 真绸精子，保存在液氮中46天后冻精复苏率和存活率为50．63％和61．02％。 通过对多种贝类和鱼类精子的超低温保存实验，不仅获得超低温保存基本 条件，并且通过显微镜观察结合前人的研究，对产生冻伤的原因和保护的机理 提出了一个模式。