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目的：食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其5年生存率与肿瘤的浸润和转移密切相关，其中淋巴道转移是食管癌最常见的转移途径。研究表明，许多恶性肿瘤在发生淋巴结转移时，均有新生淋巴管形成，这些新生淋巴管与恶性肿瘤早期淋巴结转移及其不良预后密切相关。因此，探讨食管癌淋巴道转移的可能机制，了解肿瘤转移的生物学行为至关重要。
D2-40是新发现的特异性淋巴管标志物，能特异地与淋巴管内皮反应，而不与血管内皮反应。因此，D2-40被广泛地用于标记实体肿瘤组织中的淋巴管内皮。血管内皮生长因子-C(VEGF-C)为血管内皮生长因子(VEGF)家族的一个成员，是近年来新发现的促淋巴管生长因子，可与其受体VEGFR-3结合，诱导实体瘤内或肿瘤周围的淋巴管生成和/或扩张，促进肿瘤的淋巴结转移。
为了进一步探讨食管癌的转移机制，本研究采用免疫组织化学染色法，检测食管癌组织中D2-40和VEGF-C的表达情况，评估。D2-40和VEGF-C在食管癌浸润和转移中的意义。
方法:
1、病例选择：所有资料均为邢台市肿瘤医院和邢台市矿务局总医院2004年11月～2006年10月手术切除、经病理确诊的食管鳞状细胞癌标本存档蜡块60例，术前均未行化疗和放疗。根据2000年新的食管肿瘤组织学分级标准分类，高分化鳞癌20例，中分化鳞癌14例，低分化鳞癌26例。有淋巴结转移者28例，无淋巴结转移者32例。浸润深度分两组，肿瘤浸润达粘膜层、粘膜下层或浅肌层者为浅层组，共9例，肿瘤浸润达深肌层或外膜者为深层组，共51例。另选10例病理未发现异常的食管组织作为正常对照。
2、免疫组织化学染色及结果判断：采用免疫组化S-P法，分别检测10例正常食管组织和60例食管鳞状细胞癌石蜡包埋组织中D2-40、VEGF-C表达情况及淋巴管的分布特点。
2．1 D2-40阳性结果判断：D2-40阳性免疫产物定位于细胞质，呈棕黄色颗粒。凡染成棕黄色细颗粒状，管壁由单层内皮样细胞构成，均确认为阳性淋巴管。分别对食管鳞状细胞癌组织肿瘤边缘区(正常组织与肿瘤交界区)、中心区(实体肿瘤内部)<[3]>以及正常食管组织进行计数。先在低倍镜下(100×)观察整张切片的淋巴管分布情况后，然后于高倍视野(400×)下每例计数3个视野的淋巴管数，取均值作为该病例的淋巴管密度(LVD)<[4]>，以x±S/高倍视野值(x±S/HPF)表示。
2．2 VEGF-C阳性结果判断：VEGF-C阳性免疫产物定为于细胞质，呈棕黄色颗粒。参照Kinoshita<[5]>等的判定标准，以组织中阳性细胞的比值进行判断，阳性细胞数<10％为(-)，≥10％为(+)。
3、统计学处理：在Excel中进行数据整理，应用SPSS10.0统计分析软件包，采用X<2>检验、t检验和方差分析，LND以x±S表示。
结果:
1、D2-40在正常组织及食管鳞状细胞癌中的表达结果
1．1 D2-40在正常组织及食管鳞状细胞癌中的表达情况D2-40阳性免疫产物为棕黄色颗粒，位于内皮细胞胞质。正常食管组织D2-40阳性表达的淋巴管主要位于粘膜下，分布稀疏；食管鳞状细胞癌组织中D2-40阳性淋巴管主要位于肿瘤边缘区，淋巴管密集。
1．2正常食管组织和食管鳞状细胞癌中的LVD
光镜下计数淋巴管的密度，正常食管组织LVD为3.08±1.86/HPF，而食管鳞状细胞癌为6.67±3.89/HPF，食管鳞状细胞癌组织中淋巴管密度明显高于正常食管组织(P<0.01)，提示食管鳞状细胞癌组织中内具有更丰富的淋巴管。
1.3食管鳞状细胞癌不同区域LVD的差异
免疫组化结果显示，食管鳞状细胞癌肿瘤组织不同区域D2-40阳性表达的淋巴管密度和形态特点有一定差异，肿瘤边缘区淋巴管密度明显高于肿瘤中心区(P<0.01)，在形态上肿瘤边缘区淋巴管多数呈扩张状态，而中心区的淋巴管很少扩张。
1．4 LVD与食管癌淋巴结转移的关系
淋巴结转移组和无淋巴结转移组LVD分别为9.09±2.52/HPF和7.07±2.20/HPF，淋巴结转移组LVD显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)。
1．5 LVD与食管鳞状细胞癌其他临床病理特征的关系食管鳞状细胞癌中D2-40表达与患者的年龄、肿瘤大小、分化程度以及浸润深度无关。
2、VEGF-C在正常组织及食管鳞状细胞癌中的表达情况
10例正常食管组织未见VEGF-C阳性表达。食管鳞状细胞癌组织中，癌细胞和间质细胞均有VEGF-C阳性表达，但以癌细胞为主。60例食管鳞状细胞癌VEGF-C阳性表达率为55.00％，伴淋巴结转移组病例中VEGF-C阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(71.43％vs 40.63％，P<0.05)。在高分化、中分化、低分化组VEGF-C阳性表达率分别为30.00％、57.14％和73.08％，随着肿瘤分化程度降低VEGF-C阳性表达率逐步增高(P<0.05)。深层浸润组VEGF-C阳性表达率为62.75％，明显高于浅层浸润组的11.11％(P<0.05)。VEGF-C表达与患者的年龄以及肿瘤大小无关。
3 食管鳞状细胞癌组织中VEGF-C表达与LVD的相关性
33例VEGF-C阳性表达的食管鳞状细胞癌组织中，其LVD为8.26±4.24/HPF，而VEGF-C阴性表达的病例LVD为4.17±4.11/HPF，明显低于VEGF-C阳性组(P<0.01)，提示食管鳞状细胞癌组织中VEGF-C阳性表达与LVD相关。
结论:
1、正常食管组织和食管鳞状细胞癌组织中均可见D2-40阳性表达的淋巴管，但食管鳞状细胞癌组织中淋巴管密度明显高于正常食管组织。说明食管鳞状细胞癌组织中具有更丰富的淋巴管。
2、食管鳞状细胞癌边缘区淋巴管密度>中心区，且边缘区淋巴管多数呈扩张状态，而中心区的淋巴管很少扩张；食管鳞状细胞癌伴淋巴结转移组LVD明显高于无淋巴结转移组。提示食管鳞状细胞癌边缘区淋巴管的密度和形态与淋巴结转移密切相关。D2-40的阳性表达对于判断食管鳞癌的预后有重要的参考价值。
3、VEGF-C在正常组织中无表达，食管鳞状细胞癌组织呈高表达：食管鳞癌中VEGF-C的表达与LVD呈正相关，提示VEGF-C可以诱导食管鳞状细胞癌边缘区的淋巴管增生和扩张。 4 VEGF-C在食管鳞状细胞癌中的表达与淋巴结转移和癌组织浸润深度呈正相关，而与肿瘤分化程度呈负相关。5应用免疫组化S-P法联合检测D2-40和VEGF-C的表达情况，可以评估和预测食管鳞状细胞癌侵袭和转移的潜能，并为进一步开展食管鳞状细胞癌的研究和治疗提供病理学依据。