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背景：前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤且死亡率极高，去势治疗、手术切除或放射疗法无法很好地控制癌症在组织间转移，这为有效治疗前列腺癌提出了相当大的挑战。FGFR1信号分子与前列腺癌的发生和进展紧密相关。成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)表达的起始与FGFR2表达的缺失是前列腺癌(PCa)进展过程中一个被广泛报道的事件。虽然已知一些FGFR的亚型能促进细胞增殖和存活，但对不同FGFR亚型的改变促进前列腺癌进展的机制尚不完全清楚。在本文中，我们报道了成纤维细胞生长因子1（FGF1）能增强前列腺癌细胞中的NF-κB信号，并且NF-κB信号的增强与FGFR1的表达相关。在前列腺癌细胞中破坏FGFR1激酶的活性会遏止FGF1的活性和NF-κB信号。常见的三种FGFR1激酶下游的信号通路ERK1/2，PI3K/AKT以及PLCγ在FGF1介导NF-κB信号中是非必要的。相反转化生长因子β激活激酶1（TAK1）,NF-κB信号通路的中央调控子，它是FGFR1刺激NF-κB信号所必需的。此外，我们还发现在前列腺癌细胞中FGFR1通过抑制TAK1的降解来增强NF-κB信号，从而维持NF-κB信号的持续激活。与之一致，转基因前列腺癌小鼠（TRAMP）模型中FGFR1的缺失减轻肿瘤微环境中的炎症。相反，激活JOCK1小鼠模型中FGFR1激酶增加炎症。炎症在前列腺癌的发生发展中起着重要的作用，这些发现表明FGFR1的异常表达促进前列腺癌的进展，至少有一部分作用是通过增加肿瘤微环境的炎症反应实现的。文献报道FGFR1在前列腺癌细胞中高表达，敲除FGFR1抑制前列腺癌细胞增殖的同时也改变癌细胞炎症反应，但FGFR1信号分子是如何通过影响炎症反应从而改变前列腺癌生物学行为的，研究为之甚少。因此，本课题拟在前期研究基础上，深入探讨FGFR1对前列腺癌炎症反应的调控机制，为前列腺癌靶向治疗提供理论依据。
方法：
1.利用ERK，AKT，PLCγ和TAK1的抑制剂SL327，LY294002，U73122以及(5Z)-7-oxozeaenol作用小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs），1小时后用FGF1和TNFα刺激，分析FGF1是通过哪种信号分子或通路来影响NF-κB信号，然后利用FGF1和TNFα刺激敲除TAK1等位基因的MEF△TAK1细胞，进一步确定TAK1是否是FGF1增强NF-κB信号所必须的。
2.利用HEK293细胞共表达FLAG标记的FGFR1和MYC/HA标记的TNFα受体复合物组分，使用anti-MYC/anti-HA抗体免疫沉淀下拉结合在MYC/HA标记的蛋白上的FGFR1，通过Westernblotting结果分析FGFR1调控NF-κB信号通路的具体机制，然后利用免疫共沉淀技术确定FGFR1与TAK1结合的具体结构域及TAK1磷酸化的具体位点。
3.利用CRISPR/Cas9系统敲除人前列腺癌细胞DU145中的FGFR1基因，分析比较FGFR1敲除前后TAK1有无酪氨酸磷酸化作用对其泛素化程度的影响，然后利用HEK293细胞共表达caFGFR1和正常的TAK1以及caFGFR1和酪氨酸磷酸化位点突变的TAK1，根据设定的时间点用溶酶体抑制剂MG132刺激，分析酪氨酸磷酸化对TAK1降解的影响。
4.利用Cre-LoxP重组酶系统特异性敲除自发性前列腺癌TRAMP小鼠模型前列腺组织中的FGFR1基因，分析比较FGFR1敲除前后对肿瘤微环境炎症的影响，然后利用另一种前列腺癌JOCK1小鼠模型，证实FGFR1对前列腺癌炎症反应的影响。
结果：
1.ERK，AKT和PLCγ的抑制剂SL327，LY294002，U73122抑制MEFs细胞的ERK1/2，PI3K/AKT，PLCγ信号通路对FGF1增强NF-κB信号无影响，TAK1的抑制剂(5Z)-7-oxozeaenol作用MEFs细胞后，FGF1诱导的IKKα/β磷酸化被遏止，在MEF△TAK1细胞中FGF1和TNFα无法诱导IKKα/β的磷酸化，MEF△TAK1细胞转染TAK1后，TNFα诱导IKKα/β磷酸化以及FGF1增强TNFα诱导IKKα/β磷酸化的能力被重现。
2.TAK1和TAK1-TAB1的复合物拉下FGFR1，其它TNFα受体复合物组分无法下拉FGFR1，并且只有完整的TAK1和TAK1的激酶区域能拉下FGFR1，FGFR1磷酸化TAK1激酶域中四个潜在的酪氨酸磷酸化位点。
3.溶酶体抑制剂MG132作用后，DU145△FGFR1和TAK1激酶域四个位点（4F位点）突变的DU145细胞中TAK1的泛素化增加，4F位点突变TAK1的溶酶体介导的TAK1降解速度高于正常TAK1和其他位点突变的TAK1。
4.FGFR1存在时小鼠前列腺癌模型组织切片免疫荧光染色的COX-2，F4/80阳性区域高于缺失FGFR1时。
结论：FGFR1通过抑制蛋白酶体介导的TAK1降解增强NF-κB信号促进前列腺癌的炎症反应。
方法：
1.利用ERK，AKT，PLCγ和TAK1的抑制剂SL327，LY294002，U73122以及(5Z)-7-oxozeaenol作用小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs），1小时后用FGF1和TNFα刺激，分析FGF1是通过哪种信号分子或通路来影响NF-κB信号，然后利用FGF1和TNFα刺激敲除TAK1等位基因的MEF△TAK1细胞，进一步确定TAK1是否是FGF1增强NF-κB信号所必须的。
2.利用HEK293细胞共表达FLAG标记的FGFR1和MYC/HA标记的TNFα受体复合物组分，使用anti-MYC/anti-HA抗体免疫沉淀下拉结合在MYC/HA标记的蛋白上的FGFR1，通过Westernblotting结果分析FGFR1调控NF-κB信号通路的具体机制，然后利用免疫共沉淀技术确定FGFR1与TAK1结合的具体结构域及TAK1磷酸化的具体位点。
3.利用CRISPR/Cas9系统敲除人前列腺癌细胞DU145中的FGFR1基因，分析比较FGFR1敲除前后TAK1有无酪氨酸磷酸化作用对其泛素化程度的影响，然后利用HEK293细胞共表达caFGFR1和正常的TAK1以及caFGFR1和酪氨酸磷酸化位点突变的TAK1，根据设定的时间点用溶酶体抑制剂MG132刺激，分析酪氨酸磷酸化对TAK1降解的影响。
4.利用Cre-LoxP重组酶系统特异性敲除自发性前列腺癌TRAMP小鼠模型前列腺组织中的FGFR1基因，分析比较FGFR1敲除前后对肿瘤微环境炎症的影响，然后利用另一种前列腺癌JOCK1小鼠模型，证实FGFR1对前列腺癌炎症反应的影响。
结果：
1.ERK，AKT和PLCγ的抑制剂SL327，LY294002，U73122抑制MEFs细胞的ERK1/2，PI3K/AKT，PLCγ信号通路对FGF1增强NF-κB信号无影响，TAK1的抑制剂(5Z)-7-oxozeaenol作用MEFs细胞后，FGF1诱导的IKKα/β磷酸化被遏止，在MEF△TAK1细胞中FGF1和TNFα无法诱导IKKα/β的磷酸化，MEF△TAK1细胞转染TAK1后，TNFα诱导IKKα/β磷酸化以及FGF1增强TNFα诱导IKKα/β磷酸化的能力被重现。
2.TAK1和TAK1-TAB1的复合物拉下FGFR1，其它TNFα受体复合物组分无法下拉FGFR1，并且只有完整的TAK1和TAK1的激酶区域能拉下FGFR1，FGFR1磷酸化TAK1激酶域中四个潜在的酪氨酸磷酸化位点。
3.溶酶体抑制剂MG132作用后，DU145△FGFR1和TAK1激酶域四个位点（4F位点）突变的DU145细胞中TAK1的泛素化增加，4F位点突变TAK1的溶酶体介导的TAK1降解速度高于正常TAK1和其他位点突变的TAK1。
4.FGFR1存在时小鼠前列腺癌模型组织切片免疫荧光染色的COX-2，F4/80阳性区域高于缺失FGFR1时。
结论：FGFR1通过抑制蛋白酶体介导的TAK1降解增强NF-κB信号促进前列腺癌的炎症反应。