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目的用血清药理学实验方法观察细辛含药血清对大鼠延髓背侧神经元细胞电压依赖性钠离子通道的影响。
方法1细辛含药血清的制备北细辛干燥根茎置于电热干燥箱中(40℃)干燥1h，经粉碎机粉碎，过5号筛(80目)，得细辛散剂，密封瓶中保存备用。成年SD大鼠随机分为空白血清组、细辛含药血清组，其中细辛含药血清组的细辛灌胃剂量按《中国药典》(2005版·一部)中对临床用细辛剂量的规定(1～3g)取其中间剂量2g，依据人与大鼠体表面积换算，给药剂量为其等效剂量的10倍，计算为1.78g/kg；空白血清组给予等量生理盐水。每日1次，连续8d，末次灌胃2h后固定大鼠，眼眶采血。室温下静置30min后取上清液，2500rpm离心25min，分离血清。分离的血清置于56℃水浴30min灭活，过0.22μm微孔滤膜滤过除菌，分装，-20℃条件下保存备用。2细辛含药血清对SD大鼠延髓背侧神经元INa的影响新生1～3d的SD大鼠快速断头取脑，置于0～4℃充氧(95％O2+5％CO2)的ACSF中，置于冰袋上分离延髓。振动切片机将延髓切成400～500μm厚的脑片，针头分离延髓背侧腹外侧区组织，放入通氧、32℃的ACSF中，恒温水浴平衡60min。60min孵育结束后将脑片置于0.25％胰蛋白酶消化液中，32℃孵育消化15min，后用ACSF将酶液洗去，依次用尖端热抛光处理的500μm、300μm、150μmPastuer管吹打，直到没有明显的组织块为止。悬浮液静置5min后，吸取中层细胞悬液，滴加到清洁的载玻片上，静置5～10min待细胞贴壁后放入装有1.5～2mlACSF的玻璃培养皿(直径35mm)中进行膜片钳全细胞记录。将神经元细胞钳制在-80mV，给予步幅10mV、时程为100ms的阶跃方波刺激，记录从-80mV去极化到+30mV时激活的内向电流，待细胞电流稳定后，通过多排管微量加药系统分别加入细胞外液、10％空白血清和10％细辛含药血清，在相应药液加入5min后将细胞钳制在-80mV，给予-80mV至+30mV步幅10mV、时程为100ms的阶跃方波刺激，分别记录正常细胞外液、10％空白血清和10％细辛含药血清钠电流的变化并绘制电流-电压关系曲线(Ⅰ-Ⅴ曲线)。实验过程中，多排管微量加药系统置于神经元周围，给药管口距记录细胞约100μm左右，石英加药管内径约为220μm。
结果在加入10％浓度的空白血清后神经元细胞膜INa峰值与加入普通细胞外液的空白对照组神经元细胞膜INa峰值相比从1.121±0.101略降至1.108±0.265，但与空白对照组相比，10％浓度空白血清组对大鼠DRG神经元细胞INa无显著性影响(P＞0.05)，而在加入10％细辛含药血清后大鼠DRG神经元细胞INa则可明显激活INa、INa峰值从1.121±0.101增加至1.379±0.353，且与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.01)；与空白血清组相比也有显著性差异(P＜0.01)；说明细辛含药血清在10％浓度时可明显激活电压门控性钠离子通道，而空白血清组对电压门控性钠离子通道无影响，故可消除血清中其他成分对电压门控性钠离子通道的影响。
结论1.细辛含药血清对大鼠延髓DRG呼吸神经元细胞的VGSC有明显激活作用。
2.细辛含药血清对大鼠延髓DRG呼吸神经元细胞VGSC的生物特性无明显影响。
3.细辛对呼吸中枢的影响与延髓DRG的INs激活密切相关。