研究目的： 本研究拟将小鼠同种 MHC-Ⅱ类基因H-2IA~k导入小鼠肾肿瘤细胞Renca细胞中，使Renca细胞表达H-2IA~k分子提高肿瘤细胞免疫原性，激活机体免疫系统产生抗肿瘤免疫反应，达到排斥肿瘤的目的，为肾瘤的基因治疗探索新的方法。 研究意义与依据： 一、研究肾癌基因治疗的必要性 肾细胞癌是起源于肾小管上皮细胞的癌症，早期孤立的肾癌行根治术后效果较好，但它早期不易被发现，将近一半的肾癌患者首次来7院就诊时即已属晚期约40％，患者术后复发或转移，未接受治疗者3年存活率低于5％预后不良，它同时对放疗不敏感，由于肾癌细胞具有多药耐药基因（MDR-1），细胞内的 P170蛋白能将进入癌细胞内化疗物质泵出细胞外，故一般化疗效果<10％，免疫治疗有一定疗效，IL-2被认为是治疗转移肾癌的标准制剂，Rosenberg1985年采用大剂量IL-2治疗肾癌，总缓解率20％，但副作用亦比较大，患者表现高热寒战，呕吐、腹泻，伴心肺，肝及肾功能不全，死亡率近4％，且药物价格昂贵，不易推广。使用过继免 第H军医大学98级博士研究主论文疫治疗（即将有抗肿瘤性能的淋巴细胞在体外培养增殖后再输入患者体内以提高肿瘤的缓解率），主要使用肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和树突状细胞，亦有一定疗效，但需要分离细胞，体外扩增再回输体内，而且需要重复多次，比较复杂繁琐。其他治疗如单克隆抗体、抗血管形成治疗均尚不成熟。随着分子生物学等学科发展，基因转移技术的不断完善，肿瘤基因治疗为晚期肾癌治疗提供了一种新方法。 二、同种MHC-Ⅱ类基因瘤体内注射以理论依据及优点 肿瘤基因治疗基本分为两大类：1、直接杀伤或抑制肿瘤生长，如抑制癌基因表达，导入抑癌基因，导入药物敏感基因等，针对癌基因及抑癌基因的治疗，由于癌基因及抑癌基因有上百种，其表达调控机制尚在研究之中，实际应用效果不理想，酶／药物前体系统对局限性肿瘤治疗有一定疗效，对于局部扩散、有远处转移之肿瘤，应用这类基因要求较高的转染效率，同时要求高度特异性和靶向性，目前尚难做到。2、通过提高肿瘤细胞免疫原性，依靠机体免疫系统间接杀伤或抑制肿瘤，这是目前认为较有前途的肿瘤基因治疗方法之一。 肿瘤免疫主要是T细胞兔疫，其中起主要杀伤肿瘤作用的是CDS＊淋巴细胞，CTL杀伤靶细胞，必须识别靶细胞上的MHC分子，受到MH C限耕性，但是包括肾癌在内许多肿瘤细胞表面MH C分子表达明显降低。 3 因此通过基因转移技术将MHC基因转入肿瘤细胞，可以达到MHC分子与肿瘤抗原结合，提呈抗原给T淋巴细胞，激发机体免疫系统产生抗肿瘤免疫，不少作者通过肿瘤细胞中导人MHC基因治疗肿瘤己取得了一定的疗效。 但是目前使用NfIC基因为治疗基因的研究有以下几点不足：l、多使用MHC二类基因，使用MHCJ类基因者较少。MHC二类基因进人肿瘤细胞内后，一般只能激活CDST淋巴细胞，缺少CD4”的TH的辅助，因此抗肿瘤免疫效果未达到最佳。，而MHC＊类基因转入肿瘤细胞后，可以激活CD4＋T细胞。对CTL细胞进行辅助，因此本实验设想通过使用MHC＊类基因转入肿瘤细胞来研究其对肿瘤生长的影响。2、多通过 ex vivo途径，invivo途径研究相对较少，ex vivo途径是治疗对象的细胞取出分离培养，体外导入目的基因，然后将修饰过的细胞重新回输体内，整个过程相当繁琐，而 in vivo途径则不需要细胞移植，而直接将外源 DNA象药物一样注射到机体内，使其在体内转录表达，从而发挥治疗作用，in vivo途径比起 ex vivo途径，不需要进行体外培养调控细胞，操作方便、直接、经济、疗效也比较确定，在 in vivo途径中几个可选的方法比较，DNA直接注射与病毒载体方法比较，DNA直接注射技术简单，经济无毒，能转移大的DNA片段，腺病毒和逆转录病毒介导的DNA表达不如 DNA直接注射，尽管 DNA直接注射其基因表达时间较短，然而这对肿瘤的基因治疗无大妨碍，因为肿瘤的治疗不需目 4的基因永久表达，而且质粒DNA可反复注射，多次获得抗肿瘤免疫效果。 本研究选用的治疗基因是同种MHCJ类基因是因为一方面同种MHCJ类基因可以在受体细胞中转录翻译，结合抗原肽提呈肿瘤抗原给CD4T细胞，类似于移植免疫排斥反反应的直接致敏途径。2、同种MHC在肿瘤细胞中即便不结合抗原也可以作为移植抗原，成为机体免疫系统攻击肿瘤的靶分子。3、选用同种MHC分子可以不考虑治疗对象的MHC表型，适用性较广。步骤和结果： 我们首先获得了带有小鼠MHC＊类分子口、p两链基因cDNA的质粒载体 pCEXV－3 Q和 pCEXV－3 D，通过 W’WW．fiWStm。rket·cor