龙眼胚胎发育相关基因DlFERONIA和DlCYP78A5的功能研究

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龙眼(Dimocarpus Longaan Lour.)是我国亚热带名贵果树,具有药用和营养双重功效,经济价值高。随着龙眼产业的发展及人们喜好的变化,以往的大核、果肉薄、可食率低的品种已经不能适应龙眼以鲜食为主的发展趋势,选育核小肉多的优良品种具有重要意义,因此研究龙眼种子败育机理,了解其分子机制,对龙眼的选育和生产实践等具有重要意义。本研究通过本地BLAST,将龙眼幼胚不同发育时期的转录组测序数据与已知的拟南芥种子发育相关基因进行比对,在转录组数据库中检索得到龙眼种子幼胚发育同源基因CL8111、Unigene16167、CL1842和Unigene4921,通过克隆分析龙眼四个基因的全长cDNA,最终选定DlFERONIA(CL8191)和DlCYP78A5(CL1842)作为研究对象。由于龙眼具有生物学信息不完善、植物生长周期长、不能有效转化等难题,因此本研究以拟南芥为研究载体,结合拟南芥FERONIA和CYP78A5基因的功能研究,通过构建龙眼目的基因的过量表达载体、回补载体和亚细胞定位载体获得拟南芥转基因株系来进行基因功能的验证,并通过微分干涉差显微照相分析等方法进一步探究龙眼胚胎发育机制,主要研究结果如下:1、在拟南芥中过表达DlFERONIA基因导致拟南芥种子变小,角果变小,而单角果种子数目没有明显变化,种皮细胞和成熟胚细胞变小,说明DIFERONIA通过细胞扩张调控种子大小;过表达DlCYP78A5基因导致拟南芥分枝变少,种子变大,角果变小,单角果种子数目减少,这可能由于DlCYP78A5过表达导致拟南芥的结实率降低。2、DlFERONIA基因能够恢复feronia缺失突变体表型,表现为种子变小,种皮细胞和成熟胚细胞变小,角果变小。3、DlFERONIA在拟南芥中可能通过MINI3和IKU2途径调控种子大小;DlCYP78A5在拟南芥中可能通过IKU1途径调控种子大小4、DlFERONIA和DlCYP78A5均定位在细胞膜或细胞质上。
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