干扰素(Interferon,IFN)是一类由细胞分泌的,至少在同种细胞上具有广谱抗病毒、抗细胞分裂、免疫调节活性和在不同途径上影响细胞的代谢、生长和分化的蛋白质。我国是一个养猪大国,猪的各类疾病,尤其是病毒性疾病严重危害了养猪业的发展,降低了经济效益,为此,研制出高效低成本的抗病毒和免疫增强药物是非常重要的应对措施。猪的干扰素具有广谱的抗病毒、抗肿瘤及免疫调节作用,已成为近年来研究的热点。目前已知的猪干扰素有α、β和γ三种,干扰素α属于Ⅰ型,具有广谱的抗病毒作用,且具有速效多能的特点,干扰素γ属于Ⅱ型,除具有抗病毒作用外,还具有较强的免疫调节功能。本实验利用PET-30载体系统,构建了猪IFN-α及IFN-γ基因的原核表达载体,并对重组蛋白的抗病毒活性进行检测。本研究主要分为以下两部分内容:(1)猪a、r干扰素的原核表达和纯化。根据GenBank提供的猪干扰素α和干扰素γ的基因序列设计引物,通过PCR方法扩增出目的基因,构建重组表达质粒,原核诱导表达后,用Ni2+亲和树脂层析柱纯化重组蛋白,从而为进一步研究其抗病毒活性提供了候选蛋白。(2)重组蛋白抗病毒活性的初步检测。采用细胞病变抑制法分别检测重组蛋白在PK15细胞上抗星状病毒复制的活性。结果表明纯化的猪IFN-α和IFN-γ具有一定的抗星状病毒复制的活性。将两个蛋白按照不同比例混合检测抗星状病毒复制的活性,结果显示将猪IFN-α和IFN-γ重组蛋白按照125:1的比例进行混合具有较强的活性。