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目的:观察大肠癌中Cripto-1的表达及病理特征,研究靶向沉默Cripto-1及联合5-Fu对人大肠癌细胞增殖及迁移的影响,进而探讨Cripto-1在大肠癌侵袭中的作用及机制,为大肠癌早期诊断及分子靶向治疗提供研究方向。方法:(1)用免疫组织化学方法检测大肠癌组织芯片中大肠癌组织及癌旁正常组织中Cripto-1及EMT相关因子(E-cadherin、Snail)的表达情况。(2)通过体外培养大肠癌Lovo细胞,将人工合成的Cripto-1si RNA由LipofectamineTM2000介导转染细胞,采用Western blot和实时荧光定量PCR分别从蛋白和m RNA两个水平筛选出干扰效果最好的Cripto-1si RNA。(3)靶向沉默Cripto-1基因表达及联合5Fu对人大肠癌细胞增殖、侵袭的影响,将人大肠癌细胞Lovo细胞分为4组:Lovo细胞(正常对照组)、Lovo细胞+si RNA Cripto-1(干扰组)、Lovo细胞+5-Fu10mg/L(药物组)、Lovo细胞+si RNACripto-1+5-Fu(10mg/L)(干扰+药物组)。CCK-8检测Cripto-1si RNA对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell检测大肠癌细胞运动侵袭能力,Western blot检测大肠癌细胞中Cripto-1,E-cadherin,Snail的表达情况。结果:(1)免疫组化结果显示在大肠癌组织和癌旁组织中,Cripto-1均有表达,但在癌组织中呈高表达。Cripto-1蛋白的过表达与大肠癌的临床分期、淋巴结转移显著相关(P<0.05),与病人的年龄、性别和远处转移没有显著的相关性(P>0.05)。在大肠癌组织中E-钙黏蛋白的表达低于癌旁组织(P<0.05),Snail的表达高于癌旁组织(P<0.05);且大肠癌组织中Cripto-1的表达与E-钙黏蛋白的表达呈负相关(r=-0.524,P<0.05),与Snail蛋白的表达呈明显正相关(r=0.710,P<0.05)。(2)3个si RNA干扰序列(Cripto-1si RNA-187,368,494),经RT-PCR检测3个si RNA序列对Cripto-1基因沉默均有效,其中Cripto-1si RNA-494的沉默效果最为显著,Western blot检测的结果与RT-PCR的一致。(3)通过靶向沉默Cripto-1表达及联合5-Fu作用于人大肠癌Lovo细胞后,CCK-8检测细胞增殖情况的结果显示:增殖率分别为(96.96±2.69)%、(79.42±2.46)%、(74.39±4.79)%、(62.12±2.80)%,与正常对照组比较,其余三组细胞增殖率均降低(P均<0.05),联合组细胞增殖率较Cripto-1 si RNA组、5-Fu组降低(P均<0.05),Cripto-1si RNA组与5-Fu组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell细胞迁移实验结果显示:正常对照组、Cripto-1 si RNA组、5-Fu组、联合组的穿膜细胞数分别为(185.80±4.76)、(143.60±3.36)、(128.60±4.51)、(111.60±4.28),与正常对照组比较,其余三组穿膜细胞数均减少(P均<0.05),联合组穿膜细胞数较Cripto-1 si RNA组、5-Fu组减少(P均<0.05),5-Fu组较Cripto-1Si RNA组穿膜细胞数减少(P<0.05),差异有统计学意义。Western blot检测各组Cripto-1及E-cadherin、Snail蛋白的表达情况:Cripto-1si RNA组、5-Fu组、联合组Cripto-1和Snail蛋白表达低于正常对照组,E-cadherin蛋白表达高于正常对照组(P均<0.05);联合组Cripto-1和Snail蛋白表达低于Cripto-1 si RNA组、5-Fu组,E-cadherin蛋白表达高于Cripto-1 si RNA组、5-Fu组(P均<0.05);Cripto-1 si RNA组与5-Fu组各蛋白表达比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:Cripto-1在人大肠癌中高表达;靶向沉默Cripto-1基因后显著抑制了人大肠癌细胞Lovo的体外增殖及迁移能力;Cripto-1可能参与了大肠癌的侵袭。