卡铂体外抑制Tca8113最佳化疗浓度及其诱导凋亡作用的初步研究

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目的口腔鳞癌发病率在口腔恶性肿瘤中比重很大,临床上常采用包括手术治疗和放化疗在内的综合序列治疗手段,但目前其5年生存率仅为40%左右。部分原因是由于临床化疗用药仍然停留于文献资料和主观临床经验基础上,毒副反应大,疗效难以令人满意。因此,选择最佳的化疗药物剂量,减少其毒性反应成为当前临床亟待解决的问题之一。本实验旨在初步筛选出化疗药物卡铂在不同时间间期内杀灭人舌鳞癌Tca8113细胞的最佳化疗浓度,以减少用药的不良反应和尽可能降低患者的经济负担;同时观察卡铂对人舌鳞癌Tea8113细胞系增殖与凋亡进程的影响,并进一步探讨研究其作用机制,以及在这个过程中hTERT基因表达水平的变化趋势及其调控机制,为临床治疗舌癌及其疗效预后评估提供实验理论依据。方法1将卡铂制成不同梯度浓度的系列溶液,分别加入人舌鳞癌Tca8113细胞系与人胚肺成纤维HLF细胞系,并分别于24h、48h、72h后,以MTT法获得不同浓度卡铂对两个细胞株的作用效果,从而筛选出不同时间间期卡铂的最佳化疗浓度。2经初步筛选后,以40μg/ml卡铂体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞株24h、48h、72h后,应用倒置光学显微镜观察Tea8113细胞形态学变化、继行DNA提取和琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder、流式细胞术检测凋亡率及Tea8113细胞的周期变化,并应用RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶hTERT基因的表达情况。结果卡铂体外作用于人舌鳞癌Tea8113细胞株24h、48h、72h后,其各自作用的最佳浓度分别为120μg/ml、40μg/ml、30μg/ml。卡铂能够显著抑制Tea8113细胞增殖,诱导其细胞凋亡,40μg/ml卡铂组在24h、48h、72h凋亡率分别为8.34%、12.1%、12.6%,其凋亡程度与时间呈正相关。40μg/ml卡铂作用于人舌鳞癌Tea8113细胞株72h以后,其S期的细胞分布显著增加。卡铂能抑制hTERTmRNA的表达,随卡铂作用时间的增加,细胞hTERTmRNA表达逐渐减弱。结论1卡铂体外作用于人舌鳞癌Tea8113细胞株24h、48h、72h后,其各自作用的最佳化疗浓度分别为120μg/ml、40μg/ml、30μg/ml。在相应浓度及时间间期内,卡铂对癌细胞有较大杀伤性而对正常细胞几乎没有破坏,且化疗作用随时间增加而不断增强,呈时间依赖性。2卡铂抑制Tea8113细胞增殖与其诱导癌细胞凋亡作用有关。3卡铂作用Tea8113细胞72h后,其S期的细胞分布显著增加,表明卡铂对细胞增殖周期有阻断效应。4卡铂诱导下,Tea8113细胞系凋亡随作用时间延长持续增加,伴随hTERT基因表达水平的不断降低。提示诱导细胞凋亡和抑制hTERT表达可能是其抑癌作用机制之一。
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