利用共培养系统揭示巨噬细胞对鹿茸干细胞的调控作用研究

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器官的损伤或功能衰退是目前人类所面临的主要健康问题之一,我国每年因创伤或疾病造成组织或器官的缺损及功能障碍的超过400万人,目前移植新的器官是主要的应对措施,虽然免疫抑制药物以及移植免疫学有了长足的进展,但可供移植的器官来源有限,并且容易发生免疫排斥反应,要想从根本上解决问题,关键是实现缺损器官原位的再生。鹿茸是罕见的可以完全再生的哺乳动物附属器官,因此成为研究自然界哺乳动物器官完全再生的理想模型。近些年的科学研究发现,再生的发生与免疫系统的调控密切相关,但鹿茸再生过程中免疫系统的调控机制在国内外还没有报道。鹿茸的再生基于干细胞,决定鹿茸再生的干细胞定位于角柄(着生于鹿头部的永久性骨桩,鹿茸角从其上脱落与再生)骨膜中,利用成脂、成软骨诱导液诱导角柄骨膜细胞(PPCs)发现,其可向脂肪细胞和软骨细胞分化;通过免疫荧光法检测PPCs中干细胞标记因子的表达情况,结果发现,间充质干细胞表面标记物CD90、CD105、CD73、Stro-1和神经干细胞标记物Nestin在PPCs中高表达,PPCs不表达造血干细胞标记物CD34,并且其在体外培养时表现出高增殖活性。由此说明,PPCs具有干细胞的特性,是一种特殊的成体干细胞。本研究中,用巨噬细胞的条件培养液培养PPCs,并对PPCs进行转录组测序,将质控后得到的高质量测序序列与白尾鹿基因组进行比对获得mapped data,利用FPKM法计算基因表达量。以|Fold Change|≥2且FDR<0.01为筛选标准检测差异表达基因,利用DAVID软件对差异基因进行GO功能富集注释。结果显示,经过测序获得质量不低于20的碱基比例(Q20)均高于95%,共筛选到112个差异表达的基因,其中实验组有38个差异基因上调,有74个差异基因下调。实验组上调的差异基因功能富集主要涉及细胞外基质、趋化性,以及伤口愈合和生长因子刺激的反应、骨形成等生物学过程,推测巨噬细胞可能通过分泌细胞因子改变PPCs生长的微环境,调控PPCs的生理状态,使其作出免疫应答,并参与鹿茸的再生过程。
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