中华鳖环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)的克隆、表征及表达分析

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiaoweizhuo
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
中华鳖是我国重要的淡水养殖品种,近二十年来发展迅速,养殖规模逐渐扩大。随着集约化养殖的发展,各类疾病频发,严重制约了中华鳖养殖业的健康发展。目前中华鳖疾病主要是采用化学药物防治,而养殖过程中化学药物的不规范使用将会导致较大的食品安全和环境安全问题。免疫防治是动物疾病环保、安全的防控手段,逐渐成为水产动物病害防治的研究热点,但目前关于中华鳖病害免疫防治的研究资料较少,限制了免疫防病技术在其养殖中的应用。开展中华鳖免疫相关基因的研究将有助于了解中华鳖免疫机制,运用免疫学相关知识和技术预防疾病,减少疾病暴发,保障中华鳖养殖业的健康可持续发展。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)具有DNA感受器的作用,可以识别来源于病毒、细菌及自身胞质异样DNA并促进环磷酸鸟苷-腺苷(cyclic GMP-AMP,cGAMP)的生成,进而激活干扰素刺激蛋白(stimulator of IFN genes,STING)、促进Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)和其它细胞因子的分泌,从而调控脊椎动物的免疫功能。1.利用RACE技术克隆出中华鳖cGAS基因,全长为1716bp,编码519个氨基酸,表达蛋白分子量为57.09kDa,等电点为9.73,无跨膜区域,为胞内蛋白。中华鳖cGAS蛋白存在Mab-21保守结构域,与爬行类cGAS亲缘关系最近,与鸟类亲缘关系最远。构建了中华鳖cGAS基因原核表达载体,表达重组蛋白55 kDa,免疫新西兰大白兔制备了多抗。Western-blot结果表明重组蛋白可与特异性抗体反应,具有良好的免疫效果。2.qRT-PCR结果显示,cGAS基因在中华鳖脾脏、肠道、肾脏、肌肉、肝脏、胃、皮肤、肺、血细胞和心脏等组织中均能表达,表达水平存在组织特异性,表达量从高到低依次是:脾脏、肠道、肾脏、肌肉、肝脏、胃、皮肤、肺、血细胞和心脏。在嗜水气单胞菌、Poly(I:C)和LPS三种外源物刺激下,cGAS表达量均呈现先上升后下降的趋势,但是在不同组织、不同刺激下cGAS表达水平存在差异。3.Western Blot检测发现,嗜水气单胞菌刺激后,cGAS蛋白在脾脏和肠道中显著增加,其中脾脏中cGAS蛋白在48 h表达水平达到最高值,肠道中6h达到最高值。Poly(I:C)刺激后,无论在脾脏还是肠道,cGAS蛋白的表达水平均在24 h达到最高。LPS刺激后,cGAS蛋白在肠道中12h表达水平最高。结果表明中华鳖cGAS蛋白对嗜水气单胞菌、Poly(I:C)和LPS均有较强的免疫反应。4.免疫荧光结果显示,嗜水气单胞菌刺激24h后,cGAS蛋白在中华鳖肠道的表达量明显上升。
其他文献
通过探讨影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素,建立了小鼠胚胎干细胞体外培养体系,并建成小鼠ES细胞系
随着工业的快速发展,旋转机械设备逐渐趋向于复杂化、精密化和智能化,机械设备的监测数据已经逐渐迈入“大数据”时代。滚动轴承作为旋转机械的关键零部件,一旦发生故障,轻则导致设备运行失常带来财产损失,重则将会影响人们的生命安全。因此,对滚动轴承进行故障诊断研究具有十分重要的理论意义和研究价值。传统的故障诊断方法往往需要复杂的专家知识和人工提取过程,已经无法适用于大数据的分析要求,而基于深度学习的智能诊断
近年来,不确定非线性系统控制发展迅速,国内外学者相继提出多种非线性控制方法。有限时间控制因具有收敛速度快和跟踪精度高等特点而受到越来越多的关注,且已被广泛应用于多个领域。论文针对非对称约束/外界干扰/不确定/执行器故障影响下的非线性系统的控制问题,提出非对称约束的有限时间反步控制策略,主要内容如下:首先,针对具有输出约束和外界干扰的非线性系统的跟踪控制问题,提出有限时间反步控制策略。采用非对称障碍
水泥熟料游离氧化钙(fCaO)含量是衡量熟料煅烧质量的重要指标,其精准预测对优化生产具有重要的指导作用。目前,主要采用现场取样离线化验的方法获得fCaO含量值,但该方法获得的fCaO含量值对于控制系统存在明显的时间滞后。本文针对时序数据、标签样本少等问题进行了探讨,提出融合多尺度时空特征与双向长短时记忆网络(MS-Bi LSTM)、多尺度时空特征与深度非负稀疏自编码网络(MS-DNSAE)两种熟料
本论文共分为三部分,第一部分介绍基于N-Bn-N-Boc芳酰胺高选择性合成N-酰基脲和酰亚胺的反应研究,第二部分介绍微紫青霉次级代谢产物的植化研究,第三部分主要综述了N-芳酰脲类化合物活性及其合成方法的研究现状。N-酰基脲和酰亚胺是药物化学和农业化学中重要的官能团片段,N-酰基脲的传统制备方法主要包括:1)基于尿素与活化的羧酸酰化;2)酰胺和异氰酸酯的偶联或胺和酰基异氰酸酯的偶联。酰亚胺的制备主要
T-S模糊模型已逐渐成为研究复杂非线性系统必不缺少的工具。它可以将数学理论与模糊逻辑理论相结合,精确地逼近非线性系统,又能充分利用线性系统理论及其优点。此外,非脆弱控制器在某些情况下可以更改控制器参数,从而更好地获得系统的稳定性条件。而采样控制器可以使离散时间数字控制信号在采样间隔内保持不变,只能在每一个采样时刻发生变化,实现了低成本、高可靠性的目的。因此本文将主要研究T-S模糊系统的稳定性,通过
为适应大数据时代的高效的管理模式,企业纷纷引入应用业务管理软件。但这种方式常出现软件产品与公司业务匹配度低,高定制的软件失败率高,软件不满足公司领导和基层员工需求的现象,反而造成企业信息化投资回报低,企业效率下降。如何保证软件质量,如何改善软件质量管理,这已成为企业迫切需要解决的重要现实问题。软件质量管理最终实现的价值在于给企业带来高效管理,如何有效进行软件质量控制,对保障企业的软件投资效果具有非
铁电金属是一种非常稀有的铁电极化与金属性共存的材料。经典理论曾认为这种材料不可能存在,这是因为导体中的自由电子会完全屏蔽电偶极矩,无法形成长程的极性。制备出这种材料是一件具有挑战的事情。目前,已报道的铁电(或极性)金属材料存在两个方面的问题:(1)巡游电子的迁移率较低,导电性较差;(2)铁电极化难以翻转。针对上述挑战,本文基于经典铁电材料Ba TiO3,通过La元素的掺杂,成功制备了一系列高质量的
内吞是细胞吸收胞外物质、传递胞内外信号、调控质膜蛋白水平的主要手段,对单细胞和多细胞生物的生存与适应均具有重要的生物学意义。网格蛋白介导的内吞是动植物细胞进行内吞的主要途径。近几年来,动植物网格蛋白的研究均取得了长足的进展。在植物中,网格蛋白介导的内吞在植物生长发育、环境刺激(如重力、光等)响应中扮演着非常重要的角色。生物信息学分析表明,在拟南芥中,有2个网格蛋白重链基因(CHC1和CHC2)和3
国有企业产权改革是改革开放以来国有企业改革的核心,近年来国企改革步伐明显加快,电力系统改革力度也在增速。然而,一般理论研究局限于中央企业、大型国有企业、国有股份制公司,而受国有控制的国有竞争性企业却游离在了学术研究之外,这类企业的混改的方向依然是路漫漫其修远兮。于是,本文以国有竞争性业务企业HA公司为研究对象,基础理论部分对产权理论、产权制度理论、产权结构优化的相关理论进行概述。界定“国有企业”的