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肝癌是全球发病率排名第六的恶性肿瘤,每年造成的全球死亡人数在恶性肿瘤中位居第四。我国是肝癌发病率最高的国家,每年有超过30万的人口死于肝癌。目前,肝癌的治疗手段及药物十分有限,且存在预后效果差、复发率高等问题。近年来,溶瘤病毒药物发展十分迅速,在多种肿瘤治疗上显示出良好效果,具有巨大的发展前景。肠道病毒是一种主要导致儿童手足口病的小RNA病毒。前期研究显示,肠道病毒中的柯萨奇病毒B组3型(CVB3)对宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、结直肠癌细胞具有良好的溶瘤活性,具有发展为溶瘤病毒的良好潜力。本研究将更加全面地分析CVB3对多种不同肿瘤细胞的溶瘤活性,初步揭示CVB3的溶瘤活性谱,并重点探讨CVB3应用于发展针对肝癌的新型溶瘤病毒的可行性,及开展新型抗肝癌药物的评价研究。本研究首先在体外考察CVB3分别对属于15种不同癌种的33株肿瘤细胞的杀伤效果,初步系统地考察了CVB3的溶瘤效果与潜力。研究结果显示,CVB3除对宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、结直肠癌等肿瘤细胞具有良好的杀伤效果外,对肝癌、乳腺癌以及胰腺癌等多种不同癌种的肿瘤细胞也具备较强的杀伤能力,具有较为广谱的溶瘤活性。研究发现,CVB3对肝癌细胞普遍具有较高的溶瘤活性。在体外杀伤评价实验中,CVB3对本研究使用的全部8株肝癌细胞均具有较强的杀伤能力,在较低的攻毒剂量下(MOI=0.01)也可显著杀伤上述8株肝癌细胞。本研究进一步应用人肝癌细胞裸鼠成瘤动物模型评价了CVB3在动物体内对肝癌细胞肿瘤的杀伤效果。结果显示,CVB3在体内可显著抑制裸鼠体内的肝癌细胞HepG2肿瘤的生长,并造成肿瘤细胞的坏死。本研究进一步对CVB3的溶瘤机制进行了初步的探索。研究结果显示,肝癌细胞存在的CVB3病毒受体CAR蛋白的较高水平表达可能是肝癌细胞对CVB3易感的重要原因,CVB3感染可诱导肝癌细胞发生凋亡,并导致被感染细胞释放DAMPs。本研究同时也应用体外评价方法初步开展了在上市药物库中开展了潜在肝癌抑制或治疗药物的筛选研究。该研究目的在于应用“老药新用”策略筛选可能的具有肝癌抑制能力的已上市药物,同时也为将来可能的溶瘤病毒联用药物研究提供基础。本研究通过对1818种小分子药物的抗肝癌细胞活性进行了初步评价。结果显示,其中有30种药物分子具有一定的抗肝癌细胞活性,可进一步作为抗肿瘤候选药物开展后续研究。其中,金诺芬具有相对较好的抗肝癌细胞活性,通过8株肝癌细胞的体外杀伤实验显示,该药物具有发展成抗肝癌药物的潜力。综上所述,本研究较为全面地揭示了CVB3对人肿瘤细胞的溶瘤活性谱,发现了 CVB3具有良好的抗肝癌能力,具有发展为新型肝癌治疗溶瘤病毒药物的良好潜力。同时,本研究也筛选获得了一些具有抗肝癌潜力的小分子药物。本研究可为进一步开展新型肝癌治疗药物与方法研究提供重要基础。