论文部分内容阅读
目的探讨P2X4对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson′s,PD)模型大鼠黑质中α突触核蛋白(α-synuclein)表达的影响。方法采用200-250g Wistar雄性大鼠,随机分为对照组、6-OHDA组、空载病毒阴性对照(P2X4-NC)组、目的基因阴性对照(si RNA-P2X4)组、P2X4-NC+6-OHDA组、si RNA-P2X4+6-OHDA组,每组各30只。6-OHDA组、对照组分别用脑立体定位仪将6-OHDA或含0.02%抗坏血酸的生理盐水定向注射于大鼠左侧黑质,P2X4-NC组、si RNA-P2X4组分别用脑立体定位仪将空载阴性病毒或携带抑制P2X4表达的目的慢病毒定向注射于大鼠左侧黑质,P2X4-NC+6-OHDA组、si RNA-P2X4+6-OHDA组经黑质定位注射空载阴性病毒或携带抑制P2X4表达的目的慢病毒1周后,于左侧黑质定位注射6-OHDA。造模完成后2周,腹腔注射阿扑吗啡进行行为学试验,以后每周诱导1次,第4周筛选造模成功的大鼠断头取脑,取大鼠左侧黒质组织,采用Western blot方法检测大鼠左侧黑质中P2X4、α-synuclein、半胱氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)蛋白的表达水平,采用荧光定量PCR法检测大鼠左侧黑质中P2X4、α-synuclein、caspase-1 m RNA的表达水平,采用免疫组织荧光染色法检测各组大鼠左侧黑质中TH阳性神经元数量的变化。结果黑质多巴胺能神经元免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组黑质TH阳性多巴胺能神经元数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);与P2X4-NC+6-OHDA组比较,P2X4-NC组和si RNA-P2X4+6-OHDA组大鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元数量明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,P2X4-NC组和si RNA-P2X4组TH阳性多巴胺能神经元数量与对照组相比无显著差异。Western blot检测结果显示,与对照组比较,6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组大鼠黑质内P2X4、α-synuclein、caspase-1表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);P2X4-NC组、si RNA-P2X4+6-OHDA组大鼠黑质内P2X4的表达量较P2X4-NC+6-OHDA组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。si RNA-P2X4+6-OHDA组α-synuclein、caspase-1表达量较P2X4-NC+6-OHDA组减少,差异有统计学意义(P<0.01)。荧光定量PCR结果显示:与对照组比较,6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组大鼠黑质P2X4的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);P2X4-NC组和si RNA-P2X4+6-OHDA组P2X4表达较P2X4-NC+6-OHDA组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,6-OHDA组α-synuclein表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);si RNA-P2X4+6-OHDA组α-synuclein表达较P2X4-NC+6-OHDA组明显减少,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组比较,6-OHDA组caspase-1表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);si RNA-P2X4+6-OHDA组caspase-1表达较P2X4-NC+6-OHDA组减少,差异有统计学意义(P<0.001)。结论P2X4在PD模型发病机制中具有一定作用,P2X4表达下调能够影响α-synuclein的表达,其机制可能是通过抑制caspase-1的表达来实现的,所以,P2X4表达下调可对多巴胺能神经元起保护作用。