普哥滨珊瑚土曲霉XWC21-10抗菌和乙酰胆碱酯酶抑制活性及物质的研究

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海洋真菌因能适用海洋奇特的环境,能产生大量新的且有着生物活性的物质,这些天然产物及其活性一直是各研究领域探索的热门话题,使其成为海洋药物的主要来源成为可能。本文对进行活性筛选的4株珊瑚来源真菌发酵液和菌丝体的不同极性溶液萃取部分进行生物活性分析,最终选取其中一株活性较好的真菌,对它的活性代谢产物进行相关研究,主要为了找到有很好研究价值的活性化合物,为海洋真菌的利用、开发新的海洋药物奠定基础。本论文主要研究结果如下:1、分别用不同极性的有机溶剂对菌株XWC21-5、XWC21-10、XWC22-4、XWC23-6发酵液和菌丝体进行萃取或浸泡处理,采用双层平板法和Ellman法对其分别进行抗菌实验和ACh E抑制活性,从而判断不同极性溶剂萃取部分生物活性的大小。结果发现XWC21-10菌株发酵液乙酸乙酯萃取部分均有着较好的抗菌和ACh E抑制活性。2、通过柱层析技术对菌株XWC21-10发酵液的乙酸乙酯粗提物进行粗分离,利用氯仿和甲醇的混合溶液作为展开剂进行梯度洗脱,每个比例,每50 m L收集作为为一个级分,并利用TLC技术,将具有一样Rf值的各组分合并在一起,最后有11份级分。再分别对各级分进行活性分析,最终结果表明,级分6、7均表现出较强的抗菌活性,同时级分8、11乙酰胆碱酯酶抑制活性表现较突出。3、分别对活性较强的级分通过HPLC和TLC技术对其进行相关的研究,结果表明:利用HPLC分析,得到最佳的检测条件是,进样量15μL,流速为1 m L/min,甲醇:水=65:35的比例为流动相;同时,利用薄层色谱(TLC)技术对XWC21-10菌株活性较强的级分的活性成分进行初步判断,其中生物碱的特征显色反应很明显。4、以石杉碱甲为对照,采用紫外分光光度法测定菌株XWC21-10发酵液和菌丝体中的总生物碱的含量。结果表明,测定3.2~38.4μg/m L浓度之间,线性关系较好,其线性回归方程为:A=0.108C-0.0399,R2=0.99897(n=8),最终测得生物碱浓度分别为C发酵液=0.597 mg/m L,C菌丝体=0.576 mg/m L。综上所述,珊瑚真菌XWC21-10含有抗菌活性及乙酰胆碱酯酶抑制活性,值得进一步探究,为抑菌和治疗老年痴呆症的海洋活性天然药物的开发提供一定的基础。
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