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[目的]研究京尼平苷(geniposide,GS)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤和LPS诱导RAW264.7细胞炎症的影响,在体内和体外证实京尼平苷对急性肺损伤的防治作用。[方法]1.采用气管滴入LPS诱导小鼠急性肺损伤模型,预先给予腹腔注射GS(100mg/kg,50mg/kg,25mg/kg),每天给药一次,连续给药三天,末次给药后气管滴入LPS诱导小鼠急性肺损伤模型,收集肺泡灌洗支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织样本,测定肺系数。2.HE 染色光镜下观察肺组织形态学和BALF中炎症细胞变化情况,免疫组织化学方法检测肺组织NF-κB蛋白表达和定位。3.BCA(Bicinchoninic acid)法检测气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白含量,ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)测定BALF中TNF-α、IL-1β细胞因子含量。BALF细胞涂片计数细胞数及分类细胞比例。4.采用试剂盒测定肺组织髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性及丙二醛(Malonaldehyde,MDA)的含量。5.MTT法检测不同浓度的京尼平苷对RAW264.7细胞的增殖作用,评价GS的体外细胞毒性。6.建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型。7.免疫细胞化学方法检测GS对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB蛋白表达和定位的影响。8.Western blot检测GS对LPS诱导RAW264.7细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ表达变化的影响。[结 果]1.病理形态学检测显示LPS致ALI模型小鼠肺组织呈现肺泡塌陷/肺泡间隔断裂,形成肺大泡,弥漫性肺泡炎、肺组织严重水肿等病变。2.细胞涂片,ELISA及免疫组化染色等检测显示,与生理盐水(normal saline,NS)组相比,ALI模型组小鼠BALF中蛋白总量、细胞总数、粒细胞,巨噬细胞,淋巴细胞、TNF-α、IL-1β含量及肺组织中NF-κB发生核移位阳性细胞百分比均明显增加(P<0.05)。与 ALI 模型组相比,1OOmg/kgGS,50mg/kgGS 干预组 BALF中蛋白总量、粒细胞,巨噬细胞,淋巴细胞、肺组织湿/干重比值(W/D)、肺组织匀浆MPO、MDA、NF-κB发生核移位的阳性细胞百分比均明显降低(P<0.01);50mg/kgGS干预组BALF中细胞总数、TNF-α、IL-1β含量均明显降低(P<0.05)。3.GS 体外细胞毒性较小,对 RAW264.7 细胞的 IC50=5mg/mL。4.ELISA检测TNF-α验证不同浓度LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,与control组相比,各给药组均显著升高TNF-α含量。1μg/mL LPS组中TNF-α含量显著增加(P<0.01),且明显高于 10μg/mL LPS 组 OP<0.05)。ICC 法检测1μg/mL LPS,1Oμg/mL LPS诱导RAW264.7细胞的NF-κB-p65表达变化,与control组相比,1μg/mLLPS组,10μg/mLLPS组NF-κB发生核移位的阳性细胞百分比均显著升高(P<0.001)。1μg/mLLPS组中阳性细胞百分比高于1Oμg/mLLPS组(P<0.05)。5.不同浓度的GS对LPS刺激的RAW264.7细胞TNF-α的分泌,与LPS组相比,药物组(DXM，200 μg/mLGS,10Oμg/mLGS,50 μg/mLGS)均可显著降低 TNF-α的分泌(P<0.01),但50 μg/mLGS组与LPS组相比差异无统计学意义(P>0.05);且20Oμg/mLGS组与DXM组差异无统计学意义(P>0.05),GS降低TNF-α的分泌有剂量依赖关系。6.免疫化学细胞实验:与control组比较,LPS组NF-κB发生核移位的阳性细胞百分比增加,差异有统计学意义(P<0.001);与control组比较,地塞米松(dexamethasone,DXM)组和 200μg/mLGS 组、100μg/mLgGS 组、50μg/mLGS组阳性细胞百分比减少,差异有统计学意义(P<0.001)。7.Western blot检测LC3-Ⅱ蛋白:与control组比较,LPS组LC3-Ⅱ蛋白明显增加(P<0.001);与LPS组比较,GS(200μg/mL,1OOμg/mL,50μg/mL)能明显降低自噬蛋白LC3-Ⅱ的含量(P<0.001),DXM组也能明显降低其含量(P<0.01);且200μg/mLGS组的作用优于DXM组,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]1.气管滴入LPS可成功建立小鼠ALI模型。2.GS能显著拮抗LPS致小鼠ALI病变,抑制ALI小鼠肺部炎症反应,有一定的剂量依赖关系。3.GS能降低LPS致ALI小鼠BALF中蛋白渗出、细胞总数、粒细胞,巨噬细胞,淋巴细胞比例、TNF-α及IL-1β含量,抑制肺组织NF-κB激活,抑制肺组织中MDA含量及MPO活性。4.1μg/mL LPS刺激24h可成功建立RAW264.7细胞炎症模型。5.GS能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症细胞因子TNF-α。6.GS能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症信号蛋白NF-κB激活,下调自噬蛋白LC3-Ⅱ表达。7.GS防治急性肺损伤的机制与抑制炎症信号蛋白NF-κB激活、抗氧化和抑制巨噬细胞自噬有关。