论文部分内容阅读
目的:复方HD作为经典的免疫调节经验方剂,具有多年临床应用经验,表现出显著的免疫调节作用。但由于中药复方制剂的成分较多,作用途径复杂,免疫调节的机理不明确以及是否存在毒性等原因,使其难以让世人信服。因此本研究进行了复方HD的急性毒性试验以考察复方HD的安全性,并通过腹腔注射环磷酰胺造免疫抑制小鼠模型,灌胃给予复方HD,通过测定相关免疫指标,探究复方HD发挥免疫调节作用的机制。研究方法:实验一:40只ICR小鼠,6-8周龄,随机分为正常对照组和急毒试验组,每组20只,雌雄各半。由于复方HD所含的中药各组份临床应用广泛,无明显毒副作用,且急毒预实验结果未见明显毒性反应,因此,进行最大给药量试验,即以最大灌胃体积0.4 m L/10 g,最大给药浓度2.093 g/mL,24小时内给药2次,间隔8小时,连续观察14天,记录动物的体质量变化及反应情况。于第15天小鼠摘眼球取血,采用微板法进行血浆谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)测定;肌氨酸氧化酶法进行血肌酐(Creatinine,CRE)检测;脲酶法进行血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)检测,考察复方HD对于肝肾功能的影响,并测定主要器官脏器指数,若器官有明显肉眼可见改变则进行组织病理学检查。实验二:雄性ICR小鼠48只,6-8周龄,随机分为正常对照组、模型对照组、香菇多糖阳性对照组、复方HD低剂量组、复方HD中剂量组和复方HD高剂量组,每组8只,分别以蒸馏水、蒸馏水、香菇多糖(200mg/kg)、复方HD(5g/kg、10g/kg、20g/kg)每日一次灌胃,连续10天;在第4-6天腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg)建立免疫抑制小鼠模型。第11天处死小鼠,测定其脾指数、胸腺指数,器官指数=器官质量(mg)/体质量(g);流式细胞仪检测CD3~+、CD4~+、CD8~+淋巴细胞进行T细胞亚群分析;ELISA法检测血浆IFN-γ和IL-4细胞因子水平;实时荧光定量PCR法检测脾脏转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平。结果:实验一:1、急毒试验组小鼠和正常对照组小鼠连续观察14天,状态正常,无死亡,并且两组小鼠的时间-体重变化曲线接近于平行,分析比较两组小鼠第7天和第14天体重,无统计学差异,P>0.05。2、两组小鼠的心、肝、脾、肺、肾主要器官的脏器指数无统计学差异,P>0.05,并且解剖小鼠未见器官有明显肉眼可见改变。3、两组小鼠血浆AST、ALT、CRE、BUN水平均无统计学差异,P>0.05。实验二:1、与正常对照组小鼠相比,模型对照组小鼠的体重明显降低;胸腺指数明显下降P<0.05;CD3~+细胞百分比、CD3~+CD4~+细胞百分比以及CD4~+/CD8~+比值明显降低,P<0.05;血浆IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值降低,P<0.05;脾脏转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达显著降低,P<0.05。2、与模型对照组小鼠相比,复方HD低、中、高剂量组小鼠体重下降程度有明显改善,且复方HD给药组对于小鼠体重的恢复呈现浓度依赖性;复方HD中、高剂量组小鼠的胸腺指数、CD3~+细胞百分比、CD3~+CD4~+细胞百分比、CD4~+/CD8~+比值、血浆IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4比值及脾脏转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达显著提升,P<0.05。结论:1、本研究通过急性毒性试验证明复方HD对于体重及各器官指数的影响较小,无明显肝肾毒性,安全性较高。2、本研究首次证明了复方HD能够促进环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的恢复,证明复方HD在预防及治疗免疫功能低下方面具有一定的疗效,研究结果为其进一步科学探索和临床应用提供了科学依据。