目的： 采用SYBR Green技术，建立实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测阴道加德纳菌和乳酸杆菌的方法学，对细菌性阴道病患者阴道分泌物中阴道加德纳菌和乳酸杆菌进行定量检测并对其临床应用进行评价。 方法： 1.根据Genebank的阴道加德纳菌和乳酸杆菌序列，设计引物，优化反应体系，建立阴道加德纳菌和乳酸杆菌的实时荧光定量PCR方法。 2.用聚合酶链反应(PCR)扩增所得的阴道加德纳菌、16SrRNA和乳酸杆菌基因片段通过PCR纯化试剂盒纯化，纯化产物作为标准品。将标准品10倍倍比稀释后进行荧光定量PCR扩增，以拷贝数的自然对数为横坐标，循环域值(Ct)为纵坐标制作标准曲线。 3.对实时荧光定量PCR方法进行方法学评价，包括该方法的灵敏性、线性范围、特异性和重复性等。 4.按照Amsel诊断标准诊断细菌性阴道病；定性PCR检测患者阴道分泌物中的阴道加德纳菌。 5.实时荧光定量PCR测定患者阴道分泌物中阴道加德纳菌-DNA的含量，同时测定标本中总的细菌16SrRNA-DNA的含量进行校正，即用阴道加德纳菌-DNA含量/16SrRNA-DNA含量的比值表示阴道加德纳菌的相对含量。用阴道加德纳菌-DNA116SrRNA-DNA比值的受试者工作曲线(ROC)评价细菌性阴道病的诊断价值。 6.实时荧光定量PCR测定患者阴道分泌物中乳酸杆菌-DNA的含量。用阴道加德纳菌-DNA含量/乳酸杆菌-DNA含量的比值表示阴道加德纳菌-DNA的相对含量。用阴道加德纳菌-DNA/乳酸杆菌-DNA比值的受试者工作曲线(ROC)评价细菌性阴道病的诊断价值。 7.以细菌性阴道病患者的阴道分泌物标本为研究组，比较阴道加德纳菌-DNA/16SrRNA-DNA比值的受试者工作曲线(ROC)和阴道加德纳菌-DNA/乳酸杆菌-DNA比值的受试者工作曲线(ROC)诊断细菌性阴道病的差异。 结果： 1.成功建立了实时荧光定量聚合酶链反应检测阴道加德纳菌-DNA和乳酸杆菌-DNA的方法，本方法检测阴道加德纳菌-DNA和乳酸杆菌-DNA的灵敏性均为10拷贝数/反应，线性范围均为10～105拷贝数/反应，Ct值与拷贝数之间具有良好的线性关系，相关系数分别为0.999和0.998；阴道加德纳菌-DNA的批内、批间变异系数分别为1.11％～2.70％和1.20％～1.90％，重复性好。扩增产物经测序分析显示扩增片段分别为阴道加德纳菌-DNA和乳酸杆菌-DNA的特异性片段。 2.对220例妇科门诊就诊患者阴道分泌物标本为研究对象。通过盐水湿片法，根据Asmel诊断标准44例为细菌性阴道病、12例为滴虫性阴道炎、25例为霉菌性阴道炎、139例为“其他阴道炎”和30例健康体检者。普通PCR测定结果显示，44例细菌性阴道病标本有41例阴道加德纳菌阳性，12例滴虫性阴道炎标本有8例阴道加德纳菌阳性，25例阴道性霉菌炎标本有21例阴道加德纳菌阳性，139例“其他阴道炎”中任选30例标本有25例阴道加德纳菌阳性和30例健康体检者标本有12例阴道加德纳菌阳性。由此可知，定性PCR的敏感性和特异性分别为93.2％和31.9％。 3.阴道加德纳菌-DNA含量/16SrRNA-DNA含量的比值为0.5613400，明显高于霉菌性阴道炎(P<0.05)、其他阴道炎(P<0.05)及健康体检者(P<0.05)中的含量，但与滴虫性阴道炎中的含量无明显的差异(P>0.05)。阴道加德纳菌-DNA含量/16SrRNA-DNA含量比值的受试者工作曲线分析结果显示，曲线下面积(AUC-ROC)为0.909，当阴道加德纳菌-DNA含量/16SrRNA-DNA含量的截断值为0.1026035时，诊断细菌性阴道病的总体敏感度为92.9％、特异度为80.3％、阳性预测值为74.5％、阴性预测值为91.4％、阳性似然比为4.69、阴性似然比为0.25。 4.阴道加德纳菌-DNA含量/乳酸杆菌-DNA含量的比值为4.041523，明显高于霉菌性阴道炎(P<0.05)、其他阴道炎(P<0.05)及健康体检者(P<0.05)中的含量，但与滴虫性阴道炎中的含量无明显的差异(P<0.05)。阴道加德纳菌-DNA含量/乳酸杆菌-DNA含量比值的受试者工作曲线分析结果显示，曲线下面积(AUC-ROC)为0.849，当阴道加德纳菌-DNA含量/乳酸杆菌-DNA含量的截断值为0.0268时，诊断细菌性阴道病的总体敏感度为95.1％，特异度为68.7％，阳性预测值为65％，阴性预测值为95.7％，阳性似然比为3.04，阴性似热比为0.07。 5.用阴道加德纳菌-DNA含量/16SrRNA-DNA含量比值的受试者工作曲线和阴道加德纳菌-DNA含量厚/酸杆菌-DNA含量比值的受试者工作曲线诊断细菌性阴道病，两种参数检测结果一致(0.25