PDCD5、Bcl-2蛋白在宫颈鳞癌中的表达及蓝萼甲素对宫颈鳞癌SiHa细胞的作用机制探讨

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目的:研究PDCD5、Bcl-2蛋白在宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma , CSCC )组织中的表达及与临床病理的关系;观察蓝萼甲素(Glaucocalyxin A)对宫颈癌SiHa细胞的作用并探讨其机制。方法:收集CSCC组织标本89例及正常宫颈上皮(normal cervical epithelium,NCE)组织标本25例,采用免疫组织化学法,观察CSCC组织及NCE组织中PDCD5、Bcl-2蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的Glaucocalyxin A对SiHa细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色和透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)观察给药后SiHa细胞的形态学变化;流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测给药后SiHa细胞周期和凋亡率的变化;RT-PCR检测给药后SiHa细胞凋亡相关基因PDCD5、Caspase-3、Caspase-9、p53、Bcl-2、Bax mRNA表达的变化;Western blot检测给药后SiHa细胞凋亡相关蛋白PDCD5、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果:CSCC组织中PDCD5蛋白的阳性表达率为33.71 %(30/89)低于NCE组织的76 %(19/25),PDCD5蛋白的阳性表达率与有无淋巴结转移极显著相关(P< 0.001),与病理分级低分化和高分化显著相关(P<0.05)。CSCC组织中Bcl-2蛋白的阳性表达率为67.42 %(60/89)高于NCE组织的40 %(10/25),Bcl-2蛋白的阳性表达率与宫颈癌的浸润深度极显著相关(P< 0.001),与肿瘤的病理分级及有无淋巴结转移非常显著相关(P﹤0.01)。CSCC组织中Bcl-2和PDCD5蛋白表达呈负相关(r=﹣0.427,P﹤0.01);蓝萼甲素对SiHa细胞有抑制增殖效应,且呈剂量及时间依赖趋势;Hoechst 33258染色后,荧光显微镜下见SiHa细胞的胞核致密浓染,或呈碎块状;TEM观察显示SiHa细胞出现细胞核皱缩,染色质边集等细胞凋亡的特征性改变;FCM检测结果,随着时间的延长,SiHa细胞凋亡率逐渐增加且S期细胞比例也逐渐增加;RT-PCR结果显示Bcl-2 mRNA的表达下调,PDCD5、Caspase-3、Caspase-9、p53、BaxmRNA的表达上调;Western blot结果显示Bcl-2蛋白表达下调,PDCD5和Bax蛋白表达上调。结论:PDCD5、Bcl-2蛋白的表达与CSCC的发生发展有一定的相关性,可以作为判断CSCC恶性程度的指标;蓝萼甲素对体外培养的SiHa细胞增殖具有显著的抑制作用,该作用主要与诱导SiHa细胞凋亡的同时使其细胞周期阻滞于S期有关,其分子机制可能是激活线粒体凋亡途径。
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