论文部分内容阅读
目的:通过体外实验观察自然杀伤(NK)细胞联合他莫昔芬(TAM)对乳腺癌细胞(BCC)的协同杀伤作用,并初步探究其作用机制。方法:1.选用表面受体表达情况不同的三种人乳腺癌细胞系,即ER+、PR+、HER-2–乳腺癌细胞系MCF-7,ER+、PR+、HER-2+乳腺癌细胞系BT-474及ER–、PR–、HER-2–乳腺癌细胞系MDA-MB-231;MTT法检测TAM对乳腺癌细胞及其NK细胞增殖抑制作用。2.钙黄绿素-AM释放法检测NK细胞联合TAM对乳腺癌细胞的杀伤作用。3.流式分析法分别检测NK表面活化性受体NKp44、NKp46、NKG2D,以及抑制性受体CD158a、CD158b、CD158b2、CD158e表达水平;乳腺癌细胞表面NK活化性配体MICA、ULBP1、ULBP2表达水平;以及NK细胞内穿孔素及颗粒酶B的释放量。4.ELISA法检测NK细胞分泌TNF-α和IFN-γ的水平变化。结果:1.TAM能够抑制MCF-7及BT-474的增殖,对MCF-7的增殖抑制作用强于BT-474,P<0.05;能抑制MDA-MB-231的增殖,但抑制作用较MCF-7及BT-474弱,P<0.05;对三种乳腺癌细胞的增殖抑制率具有明显的浓度-时间依赖性,P<0.05。2.确定TAM最终实验浓度为5μM作用24h。TAM对NK细胞无明显增殖抑制作用,故联合实验时可与TAM同时应用。二者具有协同杀伤作用,联合组的杀伤率明显高于单独NK细胞及TAM组,P<0.05。3.与TAM联合后,NK活化性受体NKp46表达水平升高,抑制性受体CD158a、CD158b、CD158b2、CD158e表达水平下降,乳腺癌细胞表面NK活化性配体MICA、ULBP1、ULBP2表达水平升高,P<0.05;各组NK细胞内释放穿孔素及颗粒酶增加不明显,且基础释放量较高。4.无论有无乳腺癌细胞存在,与TAM联合后NK细胞分泌细胞因子TNF-α和IFN-γ的水平均存在不同程度升高,P<0.05。结论:1.TAM能够抑制两种激素受体阳性的乳腺癌细胞的增殖,且对HER-2–细胞的抑制作用强于对HER-2+细胞;也可以抑制激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖,但抑制作用较激素受体阳性细胞弱;对三种乳腺癌细胞的增殖抑制率具有明显的浓度-时间依赖性。2.NK细胞与TAM联合体外杀伤乳腺癌细胞具有协同作用,且随效靶比增加其协同作用随之增强。3.通过实验分析其协同作用机制可能为:1)TAM可以通过增加NK细胞活化性受体及乳腺癌细胞表面NK活化性配体,并降低NK细胞抑制性受体的表达量,进而使NK细胞的杀伤能力增加;2)TAM也能够通过增加NK细胞分泌TNF-α及IFN-γ而增强其杀伤能力。