论文部分内容阅读
目的:本研究采用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)构建小鼠衰老模型,探讨当归多糖(Angelica Sinensis polysacchairides,ASP)对D-gal致衰老小鼠睾丸的保护作用,旨在阐释ASP是否能通过提高睾丸抗氧化能力,抑制p53-p21-pRb的信号通路的激活来调控睾丸细胞的衰老,为阐释当归延缓男性生殖器官衰老的新方法提供理论和实验依据。方法:1.D-gal构建衰老小鼠模型与分组给药:C57BL/6J雄性小鼠40只,随机分为对照组、ASP对照组、衰老模型组、ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组:小鼠颈背部皮下注射D-gal(120mg/kg,qd×42);对照组:小鼠皮下注射等量的生理盐水(120mg/kg,qd×42);ASP对照组:小鼠皮下注射等量生理盐水15d,第16d开始腹腔注射ASP(140mg/kg,qd×27);ASP衰老模型组:衰老模型建立方法同衰老模型组,第16d开始腹腔注射ASP(同ASP对照组)。建模期间观察各组小鼠衰老的生物学动态变化,模型构建后第2d检测各项指标;2.抽取各组小鼠静脉血检测血清睾酮水平;3.取睾丸测定脏器指数;4.用石蜡切片进行HE染色,观察睾丸组织的病理学形态;5.制备睾丸组织冰冻切片,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察睾丸组织细胞的衰老情况;6.制备睾丸组织匀浆上清液,酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,ABTS法检测总抗氧化能力(T-AOC),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;7.Western blotting检测衰老相关蛋白P53、P21表达水平。结果:1.给小鼠皮下连续注射D-gal,共42d,小鼠毛色逐渐晦暗,易脱落,皮肤弹性降低,精神差,嗜睡,进食量显著减少,体重增加缓慢,呈现显著自然衰老体征,而对照组和ASP衰老模型组小鼠无明显相关体征;2.血清睾酮结果显示:衰老模型组小鼠血清睾酮水平显著降低,与衰老模型组比较,ASP衰老模型组血清睾酮水平降低不明显;3.各组小鼠睾丸湿重及睾丸器官指数无明显差异;4.组织病理学观察结果显示:衰老模型组小鼠睾丸组织结构损伤明显,生精小管的细胞层数减少,生精细胞出现退变,睾丸间质细胞明显减少,与衰老模型组比较,ASP衰老模型组睾丸组织学结构损伤明显减轻,生精细胞退变与睾丸间质细胞减少均不明显;5.衰老染色结果显示:衰老模型组小鼠SA-β-Gal染色阳性细胞密度显著增加,与衰老模型组比较,ASP衰老模型组SA-β-Gal染色阳性细胞密度减少;6.氧化和抗氧化结果显示:衰老模型组小鼠睾丸组织匀浆中SOD及T-AOC显著降低,MDA显著升高,与衰老模型组比较,ASP衰老模型组SOD和T-AOC增高,MDA降低;7.Western blotting结果显示:衰老模型组小鼠P53、P21蛋白表达显著升高,与衰老模型组比较,ASP衰老模型组P53、P21蛋白表达显著降低。结论:1.D-gal构建的衰老小鼠可致睾丸结构与功能的损伤,出现衰老的生物学表现;2.ASP具有拮抗D-gal作用,对小鼠睾丸有潜在的保护功效;3.ASP通过提高抗氧化能力,抑制p53-p21-pRb信号通路的激活来拮抗致衰剂对睾丸细胞的损伤作用。