【摘 要】
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目的:以正常及稳定低表达AE3基因的大鼠心肌样细胞(H9c2)为研究对象,建立缺氧预适应保护模型,研究AE3蛋白在缺氧预适应保护中的作用并初步探讨其可能的作用机制。方法:将大鼠
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目的:以正常及稳定低表达AE3基因的大鼠心肌样细胞(H9c2)为研究对象,建立缺氧预适应保护模型,研究AE3蛋白在缺氧预适应保护中的作用并初步探讨其可能的作用机制。方法:将大鼠心肌样细胞(H9c2),均匀接种在六孔培养板上,随机分为五个组:未转染正常对照(Control)组、稳定转染阴性对照质粒(阴性对照组,Non-silencing shRNA)组、缺氧复氧(A/R)组、缺氧预适应(APC)组、稳定低表达AE3基因+缺氧预适应(RNAi+APC)组。检测以下指标:①细胞存活率;②H9c2中AE3 mRNA的表达;③H9c2中AE3蛋白的表达;④细胞凋亡的程度;⑤细胞内活性氧(ROS)的含量;⑥细胞中SOD及GSH-Px的活性;⑦细胞中Ca2+含量;⑧细胞中Cl-含量结果:H9c2经A/R处理后,细胞活力明显下降,AE3 mRNA和蛋白表达水平升高,细胞凋亡的程度严重,ROS含量增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,细胞中Ca2+及Cl-含量升高,与Control组比较具有显著性差异(p <0.01)。H9c2经APC处理后,细胞活力较A/R组明显升高,AE3 mRNA和蛋白表达水平也明显升高,细胞凋亡的程度显著减轻,ROS含量减少,SOD及GSH-Px的酶活性上升,细胞中Ca2+及Cl-含量下降,与A/R组比较具有显著性差异(p <0.01)。稳定低表达AE3基因的H9c2细胞经APC处理后,细胞的活力较APC组明显下降,AE3 mRNA和蛋白表达水平也相应的明显下降,细胞凋亡的程度明显加重,ROS含量增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,细胞中Ca2+及Cl-含量升高,与APC组比较具有显著性差异(p<0.01)。而转入非特异shRNA组,以上相应的指标并没有特异性变化,与Control组比较没有统计学差异(p >0.05)。结论: AE3蛋白介导心肌缺氧预适应保护作用来对抗缺氧复氧带来的心肌损伤,机制可能为通过抑制胞内氯过载及减少细胞内ROS含量,进而抑制缺氧/复氧所致的氧化应激、钙超载及细胞凋亡。
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