【摘 要】
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利用途径工程的基本原理,拟在大肠杆菌(Escherichia coli)核苷酸代谢途径中构建腺苷(AR)转化为腺苷三磷酸(ATP)新的核苷酸代谢网络.在分析了微生物中核苷酸代谢途径之后,决定
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利用途径工程的基本原理,拟在大肠杆菌(Escherichia coli)核苷酸代谢途径中构建腺苷(AR)转化为腺苷三磷酸(ATP)新的核苷酸代谢网络.在分析了微生物中核苷酸代谢途径之后,决定首先在大肠杆菌中缺失腺苷脱氨酶(ADA).构建大肠杆菌MC4100 DNA的PstI次级基因文库,用鸟枪法克隆得到含腺苷脱氨酶基因(add)的长约6.68kb的DNA片段.分别用pUC18和pSP72质粒构建出add基因的表达质粒pBD1和pBD2,并分别在JM83和BL21(DE3)宿主菌中实现了表达.最后用高效液相色谱(HPLC)分离分析菌株J<,1>1、pUC18/JM83、pBD1/JM83的细胞粗提液以及活细胞转化腺苷的混和物,表明腺苷脱氨生成肌苷是大肠杆菌分解腺苷的主要途径,脱核糖生成腺嘌呤是次要途径.因此,缺失大肠杆菌中的腺苷脱氨酶对于阻止腺苷背离ATP方向的转化、节约原料是十分需要的.
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