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第一部分DLX1过表达对人骨肉瘤细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响目的探讨DLX1过表达对人骨肉瘤细胞MG63恶性生物学行为及成骨分化的影响。方法采用构建有DLX1基因的重组腺病毒(adenovirus,Ad)Ad DLX1和空载腺病毒Ad RFP,分别感染人骨肉瘤细胞MG63,分为DLX1实验组(Ad DLX1感染组)和RFP对照组(Ad RFP感染组),观察细胞荧光表达情况并以RT-PCR和Western blot验证DLX1的表达情况;Transwell实验检测MG63细胞迁移和侵袭;DAPI染色和流式细胞术检测MG63细胞凋亡;CCK-8检测MG63细胞增殖;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和ALP读数分析MG63细胞早期成骨能力,Western blot检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的蛋白表达,茜素红染色检测细胞晚期成骨能力;RT-PCR初筛相关信号通路,Western blot验证初筛阳性信号分子的蛋白表达情况。结果1.Ad DLX1和Ad RFP分别感染MG63细胞后,与RFP对照组相比,Ad DLX1能显著增加骨肉瘤细胞MG63中DLX1的表达。2.MG63细胞中DLX1过表达后,与RFP对照组相比,细胞迁移能力和侵袭能力下降。3.MG63细胞中DLX1过表达后,与RFP对照组相比,过表达DLX1对细胞增殖、凋亡无明显影响。4.MG63细胞中DLX1过表达后,与RFP对照组相比,过表达DLX1对细胞成骨分化无明显影响。5.MG63细胞中DLX1过表达后,与RFP对照组相比,DLX1过表达可上调β-catenin m RNA和蛋白的表达。结论1.MG63细胞中DLX1过表达后,对MG63细胞的恶性生物学行为有不同程度的影响:可抑制MG63细胞的迁移和侵袭,对MG63细胞的增殖和凋亡无显著影响;对MG63细胞成骨分化无明显促进作用。2.DLX1在MG63细胞中过表达后,Wnt/β-catenin信号通路参与DLX1对MG63细胞生物学行为的调控。第二部分DLX1联合BMP9对人骨肉瘤细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响目的探讨DLX1联合BMP9对人骨肉瘤细胞MG63恶性生物学行为及成骨分化的影响。方法采用构建有DLX1和BMP9基因的重组腺病毒Ad DLX1和Ad BMP9,单独或联合感染人骨肉瘤MG63细胞,分为RFP组(Ad RFP感染组)、BMP9组(Ad BMP9+Ad RFP感染组)、DLX1+BMP9组(Ad DLX1+Ad BMP9感染组)、DLX1组(Ad DLX1+Ad GFP感染组),观察细胞荧光表达情况并以RT-PCR和Western blot验证DLX1、BMP9m RNA和蛋白表达情况;Transwell实验检测MG63细胞迁移和侵袭;DAPI染色和流式细胞术检测MG63细胞凋亡;CCK-8检测MG63细胞增殖;ALP染色和ALP读数分析细胞早期成骨能力,Western blot检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的蛋白表达,茜素红染色检测细胞晚期成骨能力;采用RT-PCR初筛相关信号通路,Western blot验证初筛阳性信号分子的蛋白表达情况。结果1.Ad DLX1单独感染MG63细胞后,细胞中DLX1的m RNA和蛋白表达上调;Ad BMP9单独感染MG63细胞后,细胞中BMP9的m RNA和蛋白表达上调;Ad DLX1和Ad BMP9联合感染MG63细胞后,细胞中DLX1、BMP9的m RNA和蛋白表达均上调。2.与RFP组相比,BMP9组、DLX1+BMP9组、DLX1组中MG63细胞迁移和侵袭能力均下降,且DLX1+BMP9组对迁移和侵袭能力的抑制较BMP9组和DLX1组有所增加。3.与RFP组相比,BMP9组、DLX1+BMP9组中MG63细胞增殖能力均下降,且两组MG63细胞受到的增殖抑制无明显差异;DLX1组细胞增殖较RFP组无明显差异。4.与RFP组相比,BMP9组、DLX1+BMP9组、DLX1组中MG63细胞凋亡无明显差异。5.与RFP组相比,BMP9组中MG63细胞ALP活性、OPN蛋白表达和钙盐沉积有所增加,但增加程度有限;DLX1+BMP9组中MG63细胞ALP活性增强、OPN蛋白表达上调、钙盐沉积明显增加;DLX1组中MG63细胞ALP活性、OPN蛋白表达和钙盐沉积无明显增加。结论1.DLX1单独作用于人骨肉瘤细胞MG63时,可抑制MG63细胞迁移和侵袭,对MG63细胞凋亡和增殖无明显影响;不能促进MG63细胞成骨分化。2.BMP9单独作用于人骨肉瘤细胞MG63时,可抑制MG63细胞迁移、侵袭和增殖,对MG63细胞凋亡无明显影响;对MG63细胞成骨分化的促进作用较弱。3.DLX1与BMP9联合作用后,可抑制MG63细胞迁移、侵袭和增殖,对MG63细胞凋亡无明显影响;可促进MG63细胞成骨分化。4.骨肉瘤是一种分化异常导致的恶性增生物,DLX1联合BMP9作用后可降低人骨肉瘤细胞迁移、侵袭和增殖的恶性生物学行为,促进人骨肉瘤细胞成骨分化。