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[目的]检测骨巨细胞瘤中P62、RANK、RANKL基因及蛋白的表达水平并分析相关性,明确P62蛋白表达对骨巨细胞瘤细胞增殖能力的影响,为骨巨细胞瘤的临床治疗寻找新的靶点。[方法]1、采用基因测序检测13例骨巨细胞瘤新鲜组织中P62基因在Exons 7和Exons 8之间点突变情况,采用qRT-PCR及Western blot检测8例骨巨细胞瘤新鲜组织和瘤旁组织中P62、RANK、RANKL mRNA和蛋白的表达情况,并分析三者相关性。2.留取骨巨细胞瘤新鲜组织,进行细胞分离,培养单核基质细胞,使用慢病毒质粒转染上调或下调P62基因表达,通过CCK8试剂盒、流式细胞术检测,观察P62基因的表达对单核基质细胞的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响。[结果]1、基因测序结果显示,P62基因在Exons 7和Exons 8之间的1340bp位置有G1340A突变,但是在415位置的氨基酸R(精氨酸)未发生突变;qRT-PCR结果显示骨巨细胞瘤组织中 P62mRNA(P=0.0459)、RANK mRNA(P=0.0007)、RANKLmRNA(P=0.0001)的表达水平显著高于瘤旁组织,且RANKL与RANK(R2=0.5435、P<0.0001)、P62 与 RANKL(R2=0.3505、P<0.0001)、P62 与 RANK(R2=0.3325、P<0.0001)均呈正相关;Western blot结果显示骨巨细胞瘤组织中P62 蛋白(P=0.0023)、RANK 蛋白(P=0.0002)、RANKL 蛋白(P=0.003)的表达水平显著高于瘤旁组织,RANKL 与 RANK(R2=0.5207,P=0.0016)、P62 与 RANKL(R2=0.3476,P=0.0162)、P62 与 RANK(R2=0.4571,P=0.004)均呈正相关。2、分离出骨巨细胞瘤的原代细胞,观察到原代细胞主要由破骨样多核巨细胞和纺锤形的单核基质细胞组成,传代48小时后破骨样多核巨细胞逐渐减少,传代2-3代后基本消失,仅剩下单核基质细胞。采用第4代细胞进行实验。质粒转染下调P62蛋白表达,发现shP62下调组1-5天细胞增殖相对OD值的均值分别为:1.081±0.076、1.192±0.015、1.226±0.012、1.249±0.019、1.386±0.038;NC对照组1-5天细胞增殖相对OD值的均值分别为:1.116±0.076、1.235±0.101、1.312±0.076、1.417±0.050、1.583±0.050,两组 OD 值第 4 天(t=3.157,P=0.0343)及第5天(t=3.279,P=0.0305)的表达差异有统计学意义。shP62下调组单核基质细胞细胞凋亡百分比为37.8%,NC对照组凋亡百分比为4.98%,两者统计学差异显著;shP62下调组单核基质细胞的细胞周期分布百分比为G0/G1期75.8%、S期12.6%、M/G2期11.6%,NC对照组单核基质细胞的细胞周期分布百分比分别为G0/G1期73.6%、S期15.2%、M/G2期11.1%,两组之间统计学差异显著。[结论]1.在骨巨细胞瘤组织中,未发现P62基因在Exons 7和Exons 8之间区域发生突变,P62、RANK、RANKL mRNA及蛋白表达较瘤旁组织中升高,三者存在正相关关系;2.P62蛋白表达能够促进骨巨细胞瘤的单核基质细胞增殖,可能通过调节细胞周期及细胞凋亡发挥作用。