双孢蘑菇疣孢霉病病原菌培养特性与化学防治研究

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双孢蘑菇CAgaricus bisporus)是一种重要的广泛栽培的食用菌。疣孢霉病是双孢蘑菇生产上的重要病害之一,经常造成严重的经济损失,制约了双孢蘑菇产业的发展。本文对双孢蘑菇疣孢霉病病原菌进行了分离鉴定和培养特性研究,调查了疣孢霉病的发生规律,开展了室内药剂筛选和田间药剂防治试验。采用常规组织分离法从发病子实体上分离到一种真菌,对该菌株进行了形态学观察、致病性验证及rDNA-ITS序列分析。根据柯赫氏法则进行的致病性验证的结果表明,采用该菌株菌丝块、分生孢子悬浮液分别接种双孢蘑菇子实体,均能产生典型的疣孢霉病症状。病原菌在PDA培养基上的菌落较圆,菌丝初为白色,之后渐成褐色,边缘整齐。根据形态学和rDNA-ITS序列分析结果,确定双孢蘑菇疣孢霉病的病原菌为有害疣孢霉菌(Mycogone perniciosa)。在供试的9种培养基中,有害疣孢霉菌在CYM、 PSA、 PDA上生长最快,在查氏培养基上生长最慢。在PDA上产孢最多,CYM上产孢最少。菌丝生长最适温度为23℃,不能在31℃及以上温度下生长。在pH3-11范围内均可以生长,其中pH5-6时生长最快。最适碳源为果糖;最适氮源为硝酸钾。在C浓度为8g/L, C:N为160:1时,菌丝长速最快。在盆栽试验中发现,覆土中添加有害疣孢霉菌孢子能抑制双孢蘑菇菌丝的生长,但也会使双孢蘑菇提早出菇3d左右。根据症状表现制定分级标准,将双孢蘑菇疣孢霉病发生严重程度分为5级,以计算病情指数。在福建省漳州市进行田间发病情况观察发现,第1潮双孢蘑菇子实体采收前就开始发生疣孢霉病,随着时间的推移,病情进一步扩展蔓延,发病程度呈现逐渐上升趋势。第2潮和第4潮是疣孢霉病发生的两个快速增长期,发病率增长速度分别达到183.40%和125.91%,病情指数增长速度分别为201.74%和160.76%。供试8种药剂都是我国允许在食用菌或者果蔬上使用的农药。室内毒力试验测定显示,各药剂在不同浓度下对有害疣孢霉菌菌丝生长都有抑制作用,其中咪鲜胺锰盐的效果最好,其为百菌清,代森锰锌效果最差,ECso值分别为0.048g/mL、3.678μg/mL和33.518μg/mL。复筛试验中,双孢蘑菇菌丝对百菌清敏感性最高,其次为咪鲜胺锰盐,对代森锰锌敏感性最低,ECso值分别为10.474μg/mL、24.355μg/mL和118.244μg/mL。采用供试药剂对有害疣孢霉菌和双孢蘑菇EC50值之比,计算选择性指数。咪鲜胺锰盐的选择性指数最小(SD=0.002),其次为代森锰锌(SD=0.283),最后为百菌清(SD=0.351)。这意味着,咪鲜胺锰盐对有害疣孢霉菌的抑制作用大,对双孢蘑菇影响较小,为合适的药剂。在第一次田间防治试验中,采用在覆土中接种107个/m2的有害疣孢霉菌孢子,咪鲜胺锰盐、代森锰锌和百菌清这3种供试药剂各3个浓度以拌土或者喷雾两种方式施药。试验结果显示,各药剂处理组的防治效果和病情指数有着显著差异,50%咪鲜胺锰盐WP稀释2000倍拌土或者5000倍喷雾的效果最好,防效分别93.12%和97.35%,持效期45d-55d。80%代森锰锌WP和75%百菌清WP的防效分别为73.13%-84.27%和25.54%-76.93%,效果较差。在第二次田间防治试验中,仅使用50%咪鲜胺锰盐WP设置3个浓度梯度,以菇床覆土层表面喷雾的方式施药,覆土中不进行有害疣孢霉菌孢子人工接种。试验结果表明,稀释2000倍喷雾防治效果最好,防效为98.05%。
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