【摘 要】
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目的观察火针疗法调控神经细胞凋亡的作用与靶点,探讨火针改善脊髓损伤（SCI）大鼠神经运动功能的机制,为促进火针的临床应用提供部分实验依据。方法将108只雌性SD大鼠随机分成火针组、模型组和假手术组,每组分1d、3d、7d、14d四个时间点。以Allen’s法制备SCI动物模型,假手术组只切除T9、T10棘突和部分椎板。假手术组、模型组不予干预,火针组采用贺氏细火针点刺T7、T8、T11、T12部位
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目（No. 81903997）:基于激活急性脊髓损伤后热休克蛋白60合成探讨火针疗法“温通”效应调控免疫微环境稳态失衡的效应机制
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目的观察火针疗法调控神经细胞凋亡的作用与靶点,探讨火针改善脊髓损伤（SCI）大鼠神经运动功能的机制,为促进火针的临床应用提供部分实验依据。方法将108只雌性SD大鼠随机分成火针组、模型组和假手术组,每组分1d、3d、7d、14d四个时间点。以Allen’s法制备SCI动物模型,假手术组只切除T9、T10棘突和部分椎板。假手术组、模型组不予干预,火针组采用贺氏细火针点刺T7、T8、T11、T12部位及旁开0.5cm处,以快针法针刺,24h/次。采用BBB评分观察火针疗法对SCI模型大鼠神经功能障碍改善情况;EB染色观察火针疗法对SCI大鼠血-脊髓屏障（BSCB）完整性的影响,采用TUNEL染色观察火针疗法对神经细胞凋亡情况的影响,Western blot检测火针疗法对神经细胞凋亡相关蛋白（TGF-β、DAP12、p-PI3K）表达的影响。结果（1）行为学评分结果:假手术组大鼠各时点评分均为21±0.00,模型组大鼠在脊髓损伤后1d、3d、7d、14d时BBB评分均明显低于假手术组,差异具有统计学意义（1d:P＜0.001;3d:P＜0.001;7d:P＜0.001;14:P＜0.001）;火针干预后,BBB评分在1d、3d、7d、14d时逐渐升高,且均明显高于模型组,差异具有统计学意义（1d:P=0.004＜0.05,3d:P＜0.001,7d:P＜0.001,14d:P＜0.001）。（2）EB染色结果显示:假手术组大鼠BSCB各时点均无或仅有少量EB渗出。与假手术组相比,模型组大鼠在4个时间点EB含量均升高,在1d、3d、14d时差异具有统计学意义（1d:P=0.045＜0.05;3d:P=0.031＜0.05;14d:P=0.009＜0.05）;与模型组相比,火针组4个时间点EB含量均降低,14d时差异具有统计学意义（P=0.031＜0.05）。（3）TUNEL染色显示:假手术组在各个时点偶见凋亡的神经细胞,模型组各时点可见大量凋亡细胞,而火针组神经细胞凋亡现象明显低于模型组。凋亡指数比较显示:假手术组大鼠4个时间点凋亡指数较低,且4个时间点未见明显变化。模型组大鼠各时点凋亡指数均明显高于假手术组,差异具有统计学意义（1d:P=0.036＜0.05;3d:P=0.017＜0.05;7d:P＜0.001;14d:P＜0.001）。火针干预后,各时点凋亡指数均明显低于模型组,差异具有统计学意义（1d:P=0.036＜0.05;3d:P=0.017＜0.05;7d:P＜0.001;14d:P＜0.001）。（4）Western blot结果显示:与假手术组相比,模型组在1d、7d、14d时TGF-β蛋白表达量均增高,仅在14d时差异有统计学意义（P=0.036＜0.05）;火针组在3d、7d时TGF-β蛋白表达量高于模型组,但仅在3d时差异具有统计学意义（P＜0.001）。与假手术组相比,模型组大鼠DAP12蛋白相对表达量在4个时点均有增高的趋势,但差异无统计学意义;与模型组相比,火针组在4个时点蛋白相对表达量均有增高的趋势,但差异无统计学意义。与假手术组相比,模型组p-PI3K蛋白相对表达量在4个时点均有增高的趋势,但仅在1d时差异有统计学意义（P=0.036＜0.05）;与模型组相比,火针组在7d时p-PI3K蛋白相对表达量明显升高,差异具有统计学意义（P=0.006＜0.05）。结论火针疗法可促进SCI大鼠神经功能恢复,其机制可能与调控TGF-β、DAP12、p-PI3K蛋白,进而减轻神经细胞凋亡,改善血-脊髓屏障完整性有关。
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