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目的：观察体外培养皮层神经元细胞进行糖-氧剥夺处理和L-NAME干预后培养基中一氧化氮（NO）含量的变化，以及对神经元细胞caspase-3的影响。方法：取新生大鼠（24h）大脑皮层组织，消化后种植在有多聚-L-赖氨酸包被的六孔培养皿中，以含10%胎牛血清DEME-HG液种植，4-8小时后换用含B27的Neurobasal培养基维持饲养。于不同时间在倒置相差显微镜下观察形态变化，分别采用免疫组化对神经元特异性标记物NSE进行鉴定。培养至第7天时，选取生长良好、均一的神经元细胞随机分为3组。分别为：正常对照组，氧-糖剥夺建立细胞损伤模型组，细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂。采用硝酸还原法检测各组培养基中NO的含量，Western-blot检测caspase-3、NSE蛋白表达，半定量RT-PCR检测caspase-3mRNA表达。结果：1.成功原代培养新生大鼠皮层神经元，经NSE免疫组化鉴定神经元纯度达90%以上。2.氧-糖剥夺致神经元损伤组培养基中NO含量(1.77±0.17)umoL/L，与正常对照组培养基中NO的含量(0.93±0．15)umoL/L和细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂组培养基中含量(0.99±0.10)umol／L比较差异有统计学意义(p<0.05)；正常对照组培养基中NO的含量与细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂组培养基中含量比较，差异无统计学意义(p>0.05)。3.氧-糖剥夺致神经元损伤组中神经元的caspase-3蛋白表达和mRNA明显高于正常对照组和细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂组中的神经元的caspase-3蛋白表达和mRNA(p<0.05)；正常对照组中caspase-3蛋白表达和mRNA表达与细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂组中caspase-3蛋白表达和mRNA表达比较，差异无统计学意义(p>0.05)。4.氧-糖剥夺致神经元损伤组中神经元的NSE蛋白表达明显低于正常对照组和细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂组中的神经元的NSE表达(p<0.05)。正常对照组中NSE蛋白表达与细胞损伤模型+L-N-硝基精氨酸甲脂组中NSE蛋白表达比较，差异无统计学意义(p>0.05)。结论：1.采用无血清原代培养新生SD大鼠皮层神经元细胞，差速贴壁进行纯化，本方法简单易行神经元纯度较高，可作为神经元体外培养的良好模型用于以后的研究。2.氧-糖剥夺可导致体外培养皮层神经元细胞一氧化氮（NO）产生过量，并造成神经元的损伤。3.合成NO的关键酶NOS的抑制剂L-N-硝基精氨酸甲脂（L-NAME）能抑制NOS活性，减少NO的产生，降低caspase-3表达，从而减弱氧-糖剥夺致皮层神经元的损伤作用，起到神经保护作用。