【摘 要】
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目的:本课题拟通过提取特发性脊柱侧弯患者及正常人的血浆外泌体,并对其数据进行统计学分析,研究血浆中外泌体与特发性脊柱侧弯畸形形成及发生发展的关系。研究血浆中外泌体中miRNA,建立表达谱,探讨血浆外泌体内miRNAs对脊柱侧弯疾病早期的诊断的价值。方法:收集6例青少年特发性脊柱侧弯患儿以及性别年龄与之相匹配的6名健康儿童的外周血15ml,离心分离血浆,采用超速离心法提取血浆外泌体,并对提取的外泌体
【基金项目】
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2016年国家自然科学基金项目(项目编号:8166036):基于骨关节结核的TLR4信号传导通路中Tollip负反馈调控的机制研究;
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目的:本课题拟通过提取特发性脊柱侧弯患者及正常人的血浆外泌体,并对其数据进行统计学分析,研究血浆中外泌体与特发性脊柱侧弯畸形形成及发生发展的关系。研究血浆中外泌体中miRNA,建立表达谱,探讨血浆外泌体内miRNAs对脊柱侧弯疾病早期的诊断的价值。方法:收集6例青少年特发性脊柱侧弯患儿以及性别年龄与之相匹配的6名健康儿童的外周血15ml,离心分离血浆,采用超速离心法提取血浆外泌体,并对提取的外泌体进行电镜检测,观察其相关数据并进行统计学分析。另提取外泌体中的miRNAs,用Next Seq CN500测序平台SE75模式进行测序,筛选差异表达的miRNAs,并对差异表达最明显的前30条miRNAs(其中包含15个上调、15个下调的miRNA)进行GO富集分析和KEGG富集分析。结果:(1)本研究成功在透射电镜下观察到12例血浆样本中外泌体,可观察到提取到的外泌体具有典型的杯口状或凹面圆盘状结构符合外泌体的电镜表现。对所提取的外泌体相关数据进行统计学分析,发现无统计学差异。(2)本研究测序miRNA总read结果显示特发性脊柱侧弯患儿血浆外泌体中的miRNA的过滤后reads与正常儿童组无差异,无统计学意义。两组数据共检测出2491条表达miRNAs,其中患儿组的血浆外泌体中的miRNA种类明显增多,这说明增多的的miRNA可能会对脊柱的侧弯畸形的发生发展产生一定的影响。经过筛选两组之间呈差异表达的miRNAs共170条,P值均<0.05,具有统计学意义。其中包括50条上调的miRNAs和120条下调的miRNAs,我们对差异表达最明显的前30条miRNAs(其中包含15个上调、15个下调的miRNA)进行GO的富集靶基因功能显示结果富集于细胞过程、代谢过程、生物调节、生物过程调节等生物学过程。其miRNA的KEGG通路分析,其靶基因信号通路富集于代谢信号通路、PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路等信号通路。结论:(1)青少年特发性脊柱侧弯患儿外周血中外泌体与正常人的大体相同。(2)青少年特发性脊柱侧弯患儿外周血中外泌体浓度与正常人血浆中外泌体浓度无统计学差异。(3)青少年特发性脊柱侧弯患儿与健康儿童的血浆外泌体中miRNA对比,共筛选出170条差异表达的miRNAs,其中有50条表达上调,120条表达下调。(4)青少年特发性脊柱侧弯患儿血浆外泌体中差异表达的前30条miRNAs预测出的靶基因富集于代谢信号通路、PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路等多个信号通路,相关信号通路可能影响青少年特发性脊柱侧弯畸形的发生。
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