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目的：功能性胃肠病(FGIDs)是消化内科常见而且占据重要地位的疾病,FGIDs被解释为具有双向调节作用的脑一肠轴通过社会心理因素和肠道生理的改变(动力/或内脏感觉障碍)相互作用的临床表达。功能性消化不良(FD)和肠易激综合征(IBS)都是西方国家常见的胃肠道疾病,发病率分别为10-20％和20-40％。FGIDs是常见的慢性疾病,仅IBS,北美约3000万人符合诊断标准。Fgins和消化不良患者胃排空延迟密切相关,约40％的功能性消化不良患者有胃排空延迟。规范化的药物治疗功能性消化不良包括:抑酸剂和促动力剂,但是这些药通常并不能够得到满意的疗效,降低了病人的生活质量,增加了医疗的经济负担,所以大量的未被证明的替代品得到了广泛应用。
中国传统医学非常重视脾胃的功能,中医药对脾胃病的治疗有着完整的理论和相当丰富的经验。中草药在治疗消化不良症状方面具有悠久的历史,包括单味药或成方。功能性消化不良在症状学上和中医理论的“痞满”非常相似,腹胀多为其主诉。脾胃虚弱是功能性消化不良的主要原因,导致运化失司和升降失调。脾胃虚弱导致消化、吸收和代谢功能降低,因此出现营养不良,一般功能活动的降低。消痞Ⅱ号是口服的中草药方剂,通过传统中医理论“益脾气”为法调节胃肠道动力并治疗功能性消化不良。在本研究中,我们通过建立胃动力障碍动物模型,观察消痞Ⅱ号对小鼠胃排空及肠推进的影响,并检测本方对M3受体及神经递质NO及VIP的影响。
方法：
1、消痞Ⅱ号对阿托品介导的胃肠动力障碍小鼠的胃肠动力及地受体的影响。
120只健康雄性昆明小鼠随机分为正常组(n=30),消痞Ⅱ号组(n=30),阿托品组(n=30),消痞Ⅱ号+阿托品组(n=30)。正常组、阿托品组小鼠每日2次灌服生理盐水(0.2ml/10g体重);消痞Ⅱ号组、消痞Ⅱ号+可托品组小鼠每日2次灌服消痞Ⅱ号(0.2ml/10g体重),共7天。最后1次灌服50分钟后,阿托品组和消痞Ⅱ号+阿托品组小鼠腹腔注射阿托品2mg/kg。同时,正常组和消痞Ⅱ号组小鼠腹腔注射生理盐水2mg/kg。阿托品作用30分钟后,给予以上4组小鼠灌服营养半固体炭末糊,0.5ml/只。进食营养半固体炭末糊30分钟后,脱颈处死所有小鼠,剖腹,将贲门至回盲部迅速取出。结扎贲门和幽门,称胃全重,然后沿胃大弯切开,用水冲掉胃内容物,滤纸吸干,称重。空肠到回盲部取出放入冷水中,防止继续蠕动,将其自然拉直铺平,测量幽门括约肌至半固体糊前端的长度及幽门至盲部的长度。胃排空率(％)=[1-(胃全重一胃净重)/0.5]×100％,小肠推进率(％)=幽门至炭末糊前端的长度/幽门至回盲部的长度×100％。胃壁M3受体的免疫表达通过SP方法和光学光密度分析检测。
2、消痞Ⅱ号对功能性消化不良小鼠胃排空及NOS、VIP表达的影响。
120只健康雄性昆明小鼠随机分为正常组(n=30),模型组(n=30),消痞Ⅱ号组(n=30),莫沙比利组(n=30)。正常组小鼠正常进食水,其余组小鼠单日喂饲甘兰,双日喂猪脂,数量不限,持续9天,建立功能性消化不良小鼠动物模型。第10天,分别给予正常组、模型组小鼠灌服生理盐水(0.2ml/10g体重),消痞Ⅱ号组小鼠灌服消痞Ⅱ号(0.2ml/10g体重),莫沙比利组小鼠灌服莫沙比利混悬液(0.2ml/10g体重),共7天。第17天,并且禁食,最后1次灌服药物20分钟后,给予所有小鼠灌服营养半固体炭末糊,0.5ml/只。30min后,脱颈处死所有小鼠,剖腹,结扎贲门和幽门,将胃迅速取出。称胃全重,然后沿胃大弯切开,用水冲掉胃内容物,滤纸吸干,称重,计算胃排空率(％)=[1-(胃全重一胃净重)/0.5]×100％。将胃排空实验中留取的胃窦标本取出,进行梯度酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,4μm切片,HE染色,在光学显微镜下观察胃窦组织结构。胃壁M3受体的免疫表达通过SP方法和光学光密度分析检测。
3、统计学处理采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计分析,计量资料以均数士标准差((x)±s)表示,组间比较应用方差(ANOVA)分析,P＜0.05认为差异有统计学意义。
结果：
1、消痞Ⅱ号对阿托品介导的胃肠动力障碍小鼠的影响正常组和阿托品组之间,胃排空率和肠推进率存在显著差异(P＜0.01,P＜0.01)。灌服消痞Ⅱ号7天后,消痞Ⅱ号能够增加胃排空率(69.27±9.77％vs正常组54.67±16.01％,P＜0.01)和肠推进率(84.71±8.39％vs正常组74.97±11.93％,P＜O.01)。消痞Ⅱ号组和消痞Ⅱ号+阿托品组之间也存在显著差异(P＜0.01)。消痞Ⅱ号明显改善阿托品介导的胃排空率和肠推进率的减少。注射阿托品后,胃底平滑肌M3受体比正常组明显减少(P＜0.01),消痞Ⅱ号+阿托品组胃底平滑肌M3受体水平比正常组明显增高(P＜0.01)。
2、消痞Ⅱ号对功能性消化不良小鼠胃排空及NOS、VIP表达的影响。
正常组小鼠毛色洁白光亮,柔软光滑,精神状态良好;模型组小鼠毛色发黄干枯,粪便臭秽难闻,精神疲惫。经治疗后小鼠毛色、粪便、精神均有所好转。各组小鼠胃黏膜均无器质性病理组织学改变。模型组小鼠胃排空率下降(P＜0.05):各治疗组与正常组比较,胃排空率上升有显著统计学意义(P＜0.01),说明2组药物均能提高胃排空率:消痞Ⅱ号组与莫沙比利组比较无明显差异(P＞0.05)。消痞Ⅱ号可明显增加FD小鼠胃窦NOS含量,降低FD小鼠VIP含量,其结果与莫沙比利无明显差别。
结论：
1、消痞Ⅱ号具有促进正常小鼠胃排空及肠推进的功能,并能纠正阿托品介导的胃排空障碍。M3受体参与了阿托品调节胃肠道动力的机制。消痞Ⅱ号通过增加M3受体的水平来拮抗阿托品所致的胃肠道动力障碍。
2、消痞Ⅱ号是干预功能性消化不良小鼠的有效方剂。消痞Ⅱ号通过补益脾气增加功能性消化不良小鼠的胃排空率。实验证实促进NOS和抑制VIP的分泌或释放是消痞Ⅱ号调整胃肠运动的作用机制之一。