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第一部分DOCK8通过WASP和CD19调控BCR信号和记忆B细胞的激活背景:DOCK8（Dedicator of cytokinesis 8）缺陷是一种原发性免疫缺陷病,导致常染色隐性高IgE综合征（AR-HIES）。DOCK8蛋白属于非典型鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEFs）,参与细胞骨架的调控。DOCK8患儿易患各种病原菌导致的反复慢性感染及严重的过敏症,体液免疫应答受损,记忆B细胞严重缺陷,免疫球蛋白异常。记忆B细胞在维持体液免疫记忆上发挥重要功能,而其早期激活是其发挥免疫反应的第一步。已有研究揭示了DOCK8对B细胞发育和功能的影响,而在B细胞受体（BCR）信号及记忆B细胞激活中的作用仍未见报道。方法:我们建立了DOCK8敲除小鼠模型,收集DOCK8患儿外周血单个核细胞,并分离B细胞和标记记忆B细胞,分别用游离抗原和膜相关抗原活化B细胞,用共聚焦显微镜、全内反射荧光显微镜和磷酸化流式细胞术研究DOCK8缺陷B细胞的早期活化事件。用流式细胞术检测DOCK8缺陷时B细胞亚型改变。流式细胞术、蛋白质免疫印迹方法检测B细胞中WASP的蛋白水平,实时荧光定量PCR检测B细胞中Wasp、Cd19、Btk、Cd21、Cd81的mRNA水平,并用双荧光素酶报告基因方法检测DOCK8对Cd19转录的调控。结果:（1）DOCK8参与了B细胞的激活。B细胞活化后DOCK8被重新分布,并且与BCR有很好的共定位。（2）DOCK8缺陷下调了BCR信号、WASP的表达与活化。研究发现DOCK8缺陷B细胞中调节BCR信号的关键正向调控分子pBtk和pCD19水平降低,WAS（Wiskott–Aldrich syndrome）蛋白的表达及活化水平下降。DOCK8敲除小鼠和DOCK8缺陷患儿B细胞在体外均有以上相似表现。（3）DOCK8缺陷小鼠边缘区B细胞与生发中心B细胞形成缺陷。CD19介导的Btk信号对边缘区B细胞与生发中心B细胞的形成至关重要,与文献报道一致,我们同样发现DOCK8缺陷小鼠MZ B细胞数量和比例明显下降,非免疫小鼠和NP14-OVA免疫2周小鼠生发中心B细胞数量和比例下降。（4）课题组前期研究已证实WASP可正向调控cd19转录,本研究同样发现DOCK8也调控cd19的转录水平。（5）证实DOCK8患儿记忆B细胞早期活化受损,BCR簇形成降低,B细胞扩张受限,体外诱导初始B细胞向记忆B细胞分化缺陷。结论:本研究揭示了DOCK8通过WASP和CD19调控BCR信号和记忆B细胞的早期激活,为解析DOCK8缺陷患儿的体液免疫缺陷提供了一个新线索。第二部分DOCK2对调节性T细胞功能影响的机制研究背景:DOCK2（Dedicator of cytokinesis 2）属于CDM蛋白超家族,DOCK2缺陷引起联合免疫缺陷病,患儿有早发性的致死性的细菌和病毒感染,如不及时进行造血干细胞移植,患儿通常于儿童期夭折。已有的DOCK2患儿和敲除鼠的研究证明DOCK2可以通过激活Rac的活性来调节T、B、NK、中性粒细胞的功能,并且可以调节免疫的稳态,但DOCK2是否对调节性T细胞（Treg）数量和功能的影响还未见报道。方法:对小鼠进行气管插管检测小鼠肺功能,分离野生型小鼠和DOCK2敲除小鼠肠道组织进行HE染色观察肠道病理变化,免疫荧光观察肾脏组织自身Ig G沉积,ELISA检测血清双链DNA。分离野生型小鼠和DOCK2敲除小鼠脾脏、外周淋巴结、肠系膜淋巴结和胸腺淋巴细胞,用流式细胞术检测T细胞中CD4、CD8、CD44、CD62L、CD25和Foxp3的表达,分析CD4+CD25+细胞中KI67、Annex V和Neuropilin的比例和平均荧光强度,CD4+CD25+Foxp3+细胞中CTLA4和PD1的比例和平均荧光强度。检测磁珠分选CD4+CD25+细胞的体外增殖、稳定性和体内迁移能力,磁珠分选CD4+CD25+细胞在体外对初始T细胞增值抑制能力。体外刺激淋巴细胞检测T细胞中细胞因子的产生。并通过骨髓嵌合小鼠模型验证DOCK2缺陷后的表型变化是否是细胞固有的。结果:（1）DOCK2 KO小鼠气道通气阻力增加,肠道绒毛明显破坏,肾脏Ig G沉积明显,血清双链DNA较野生型无统计学差异。（2）DOCK2缺陷后小鼠的T细胞稳态被打破,CD4+T细胞数量和比例显著降低。脾脏和淋巴结中初始T细胞（CD44low CD62Lhigh）明显减少,活化的T细胞（CD44high CD62Llow）显著增多。通过对骨髓嵌合小鼠模型检测发现DOCK2缺陷小鼠重建的CD4+T细胞数量和比例明显降低。（3）DOCK2缺陷小鼠胸腺、脾脏和淋巴结中CD25和Foxp3在CD4细胞中比例升高,骨髓嵌合小鼠中有相同变化。DOCK2缺陷小鼠CD4+CD25+细胞中Ki67、Annex V和Neuropilin的平均荧光强度与野生型相比无明显差异。DOCK2缺陷小鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+Foxp3+细胞中CTLA4和PD1的平均荧光强度表达比野生型明显增高。（4）DOCK2缺陷CD4+CD25+细胞在体外CD3、CD28和IL2的刺激下增殖能力减弱,增殖细胞Foxp3的平均荧光强度降低,在CD45.1小鼠体内迁移障碍。（5）DOCK2缺陷CD4+CD25+细胞在体外对初始T细胞的增殖抑制能力缺陷。（6）DOCK2缺陷引起T细胞产生的IL4、IFN-?、IL17细胞因子增多。结论:DOCK2敲除小鼠有器官炎症和自身免疫表现,DOCK2敲除小鼠T细胞过度活化,刺激后分泌炎症因子增多,Treg的数量、比例异常,DOCK2 KO Terg体外功能缺陷,体内迁移障碍。但是DOCK2是怎样调节Treg的机制我们还在进一步研究当中。总之,我们发现DOCK2可以影响Treg的数量和功能。