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[目的]炎症反应在心血管系统疾病如心肌缺血(myocardial ischemia)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)等发病过程中起重要作用。信号分子硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)在心血管疾病中发挥重要的作用。本研究旨在观察外源性H2S对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)的炎症反应,同时观察外源性H2S对心肌梗死大鼠心肌炎症反应、重构以及血管新生的影响及可能机制,以及内源性H2S调节剂炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine, SPRC),对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的H9c2心肌细胞的炎症反应以及对TNF-α诱导的HUVEC的炎症反应的影响,并分别探索SPRC抗炎的可能机制,旨在阐明H2S在心血管炎症反应中的作用并开发出有效的治疗心血管炎症的药物。[方法]1.采用TNF-a诱导HUVEC功能紊乱,以地塞米松(dexamethasone,Dex)和乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)为阳性对照；采用细胞黏附试验观察NaHS对U937单核细胞与TNF-α激活的HUVEC(?)(?)附的影响；实时逆转录聚合酶联反应(realtime reverse transcription-polymerase chain reaction, realtimeRT-PCR)观察NaHS对TNF-α诱导的黏附分子,如细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)、血管细胞黏附分子(ascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)、P-选择素(P-selectin)和-选择素(E-selectin)的mRNA表达;Western blot法检测NaHHS对TNF-α诱导的ICAM-1、VCAM-1、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)的蛋白表达、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)的磷酸化、ⅠκBα的降解以及核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)p65磷酸化和转位的影响；免疫荧光检测TNF-α诱导的NaHS对NF-KB p65转位和细胞内氧自由基(reactive oxygen species, ROS)的影响；2.冠状动脉前降支永久性结扎制备大鼠心肌梗死模型,给予NaHHS或DL-炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine, PAG)及溶媒对照,分别于心肌梗死后3、14、42天取材。Realtime RT-PCR观察NaHS对ⅠCAM-1、VCAM-1、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的mRNA表达；采用Western blot法检测NaHS对iNOSs、toll样受体2(toll like receptor2, TLR2)、内皮依赖性一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)、Ⅰ和Ⅲ型胶原(collagen)、HO-1、胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionase-γ-lyasis, CSE)、金属基质蛋白酶(1natrix metalloproteinases, MMPs)、内皮细胞生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)、MAPK的磷酸化、Akt的激活；免疫组织化学法观察NaHS对iNOS、ICAM-1、VEGF、CD34、I和Ⅲ型胶原表达以及CD68+的炎症细胞浸润；Masson染色观察NaHS对心肌纤维化的的影响；超声心电图观察NaHS(?)(?)心功能的影响；体外培养原代心肌成纤维细胞,采用血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)刺激,Western blot观察NaHS对心肌重构相关蛋白(Ⅰ型胶原、MMPs)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase4, Nox4)表达及信号通路(p38MAPK)激活的影响；免疫荧光观察NaHS对Ang Ⅱ诱导的Ⅰ型胶原表达的影响；3.采用TNF-a诱导HUVEC功能紊乱,同时以Dex和NAC为阳性对照；采用细胞黏附试验观察SPRC(?)寸U937单核细胞与TNF-α激活的HUVEC黏附的影响；Western blot检测SPRC对TNF-α诱导的ICAM-1、VCAM-1、CSE的蛋白表达、MAPK的磷酸化、IκBα的降解以及NF-κB p65磷酸化的影响；免疫荧光检测TNF-α诱导的SPRC对NF-κB p65转位和细胞内ROS的影响;4.采用LPS诱导H9c2心肌细胞炎症反应,采用RT-PCR观察SPRC对LPS诱导的炎症介质,TNF-α、iNOS(?)(?)ICAM-1mRNA表达的影响；酶联免疫吸收法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测(?)SPRC对LPS诱导的TNF-a释放的影响;Western blot检测(?)SPRC对Akt磷酸化的影响以及SPRC对LPS诱导的ERK1/2的磷酸化、IkBα的降解以及NF-κBP65磷酸化的影响；免疫荧光检测(?)SPRC对LPS诱导的细胞内ROS的影响；[结果]1NaHS剂量依赖性的抑制TNF-a诱导的ICAM-1和VCAM-1蛋白和mRNA表达、P-selectin和E-selectin mRNA表达以及U937单核细胞与HUVEC的黏附；NaHS剂量依赖性诱导HO-1表达,同时NaHS还能够在TNF-α刺激的HUVEC中剂量依赖性诱导HO-1表达；NaHS剂量依赖性的抑制TNF-α诱导的ROS产生NF-kB激活(通过IκBα的降解以及NF-κB p65磷酸化和核转位评价)；2NaHS明显抑制心肌梗死后3、14天的ICAM-K VCAM-K TNF-a和iNOS的mRNA的表达以及心肌梗死后3天的CD68+炎症细胞浸润、NF-κB的激活、TLR2、ICAM-1(?)口iNOS表达,而PAG则部分的加重心肌梗死后炎症反应；NaHS明显改善心功能、缓解心肌重构及纤维化并促进新生血管,PAG则加重心肌重构及纤维化并抑制血管新生；NaHS明显促进心肌梗死后HO-K CSE以及VEGF表达；并可激活存活通路Akt,并抑制p38通路的激活；在体外培养的原代心肌成纤维细胞中,NaHS可抑制(?)Ang Ⅱ诱导的MMP-2、MMP-9、Ⅰ型胶原和Nox4表达,同时NaHS还能够抑制p38通路的激活；3SPRC剂量依赖性的抑制TNF-a诱导的ICAM-1和VCAM-1蛋白表达和U937单核细胞与HUVEC的黏附；同时SPRC可明显诱导TNF-α刺激的HUVEC细胞中CSE表达；SPRC有效抑制TNF-a诱导的细胞内ROS产生、JNK1/2激活、IκBcα的降解以及NF-κB p65磷酸化和核转位；4SPRC剂量依赖性抑制LPS诱导的iNOS诱导的CAM-1mRNA和Ⅰ(?)NF-α mRNA表达和蛋白；SPRC剂量依赖性的激活磷酸肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)/Akt通路；SPRC有效抑制LPS诱导的ERK1/2激活、IκBα的降解以及NF-κB p65磷酸化、细胞内ROS产生。[结论]1.外源性H2S能有效的抑制TNF-a诱导的血管内皮细胞炎症反应,其机制与上调HO-1表达、抑制NF-κB激活相关；2.外源性H2S可抑制急性心肌梗死引起的炎症反应,其机制至少与抑制NF-κB信号通路而抑制炎症反应相关；外源性H2S可明显改善心肌功能,其作用与H2S抑制心肌重构、纤维化、促进血管新生相关；3.SPRC(?)(?)通过抑制TNF-α诱导的黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)表达而抑制U937单核细胞与内皮细胞的黏附,其机制与调节CSE表达、抑制NF-κB信号通路相关；4. SPRC能通过抑制LPS诱导的H9c2心肌细胞炎症反应,其机制与调节CSE/H2S系统、激活P13K/Akt通路、抑制NF-κB信号通路相关。