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背景:利拉鲁肽（Liraglutide）是人体内源性物质胰高血糖素样肽-1（GLP-1）结构类似物,能够结合并激活GLP-1受体,以葡萄糖浓度依赖的方式促进胰岛素的分泌,抑制胰高血糖素释放,此外利拉鲁肽还可减缓胃排空,减少能量摄入而发挥减肥作用。虽然利拉鲁肽在临床使用较广,但该物质定量检测方法的发展却相对滞后。传统的免疫学方法自开发以来因其操作简单、快速,在普通实验室即可操作而应用广泛。然而当待测物分子量相对较小时,免疫学方法的特异性就会因交叉反应等原因变差。免疫学方法一次实验只能检测一种化合物,如果联合用药,一个样本则需要进行多次实验。目前,国内外越来越多的实验室采用LC-MS/MS方法替代免疫学方法开展血药浓度检测。目的:建立选择性好、灵敏度高、重现性好的LC-MS/MS方法,用于SD大鼠K2EDTA血浆中利拉鲁肽浓度测定及药代动力学研究。方法:以利拉鲁肽-缬氨酸-D8为内标,采用100%无水乙醇（含2%氨水）作为蛋白沉淀剂,将处理后的样本经C18色谱柱进行分离。离子化方式为正离子模式、电喷雾离子化（ESI）,扫描方式为多反应监测（MRM）,监测离子对分别为利拉鲁肽（m/z 938.8→1064.3）和利拉鲁肽-缬氨酸-D8（m/z 940.8→527.6）。流动相为0.1%FA水溶液和0.1%FA乙腈,采用梯度洗脱程序,流速为0.6 m L/min,分析时间3min。结果:1.空白基质对利拉鲁肽和内标的平均干扰分别是5.3%和0.2%,待测物对内标干扰7.5%以及内标对待测物的干扰4.3%;校正标准曲线范围为1.00~1000ng/m L;批内精密度（%CV）小于8.2%、准确度偏差（%RE）为-14%~13%;批间精密度（%CV）小于6.2%、准确度偏差（%RE）为-3.7%~1.1%;低、中、高质控样品提取回收率分别为45.6%、50.4%和52.5%,变异系数分别为7.4%、5.1%和7.3%,内标提取回收率48.7%,变异系数7.5%;超出浓度上限的样品可进行5倍浓度稀释;考察了血浆样品反复冻融3次稳定性、储备液在-20°C条件下储存30天稳定、工作溶液常温条件下放置24h的稳定性、血浆样品在-80°C条件下储存30天的稳定性以及自动进样器温度下放置24h的稳定性等,考察内容均在接受范围内。2.分别对皮下给药组、尾静脉给药组血浆样品经LC-MS/MS方法和ELISA方法测定得到的结果进行统计分析,差异均无明显统计学意义。3.对于SD大鼠皮下给药组在100μg/ml利拉鲁肽剂量下,LC-MS/MS法测得的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞、Tmax、t1/2、MRT、CL、Vd分别为203±31.6 ng/m L、2672±278 h·ng/m L、2685±279 h·ng/m L、6 h、4.24±0.133h、9.18±0.273 h、0.0375±0.00377 m L/h/kg、0.230±0.0251 m L/kg。ELISA法主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞、Tmax、t1/2、MRT、CL、Vd分别为201±32.047ng/m L、2676.4±265.9 h·ng/m L、2693.8±266.4 h·ng/m L、5.333±1.155h、4.502±0.091h、9.30±0.287 h、0.0374±0.00359 m L/h/kg、0.243±0.0258 m L/kg。除MRT外,其余参数差异无明显差异,总体结果基本一致。4.对于SD大鼠尾静脉给药组在100μg/ml利拉鲁肽剂量下,LC-MS/MS法测得的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞、Tmax、t1/2、MRT、CL、Vd分别为1749.333±402.394 ng/m L、9918.954±321.413 h·ng/m L、9906.765±320.964h·ng/m L、0.83±0h、3.624±0.143 h、5.745±0.345 h、0.0101±0.000349 m L/h/kg、0.0528±0.00205 m L/kg。ELISA法测得的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞、Tmax、t1/2、MRT、CL、Vd分别为1777±358 ng/m L、9905±288 h·ng/m L、9920±292 h·ng/m L、0.83±0h、3.77±0.509 h、5.72±0.334 h、0.0101±0.000284 m L/h/kg、0.0548±0.00670 m L/kg。所有参数差异无明显差异,总体结果基本一致。结论:1.建立了一种快速、简便的LC-MS/MS方法,经过系统验证后成功应用于SD大鼠K2EDTA血浆中利拉鲁肽浓度的测定。2.LC-MS/MS方法与ELISA方法检测的结果具有较好的一致性,验证了LC-MS/MS方法在利拉鲁肽药代动力学研究中的适用性。相比之下,LC-MS/MS分析以其重现性好、选择性高等优势为免疫测定提供了一种很好的替代方法,可缩短方法开发时间并提高特异性。