研究背景及目的:胃癌（gastric cancer）是世界上常见的恶性肿瘤之一,发病率位于全球恶性肿瘤第五位,死亡率位居第三位。80%胃癌患者在确诊时已处于进展期,化疗成为大多数术后复发或无法手术的患者的主要治疗方法,但在治疗过程中肿瘤对药物的抵抗作用影响了化疗药物的疗效,成为临床上亟待解决的问题。近年来,许多研究表明肿瘤耐药的发生与肿瘤微环境（TME）密切相关。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）作为TME的主要成分之一,以直接或间接的方式参与调控肿瘤对化疗药物的抵抗。Yes-associated protein 1（YAP1）作为Hippo信号通路中重要的效应分子,通过共转录激活效应,主要促进下游转录因子TEADs发挥转录调控作用。有研究表明YAP1是多种癌症类型的不良预后指标,如肝癌、胃癌、结直肠癌、非小细胞肺癌等,并且YAP1的激活可诱导肿瘤对化疗药物的抵抗。我们前期的研究表明,YAP1作为HER4的重要下游因子,通过诱导上皮细胞和间质细胞的转化,促进HER2阳性胃癌患者曲妥珠单抗的耐药。然而YAP1是否可以调控胃癌对5-Fu的化疗抵抗目前尚无研究。因此,本课题拟通过分子生物学的方法,获得YAP1通过调控TAMs影响胃癌对5-Fu化疗抵抗的证据,确立YAP1作为克服胃癌对5-Fu化疗抵抗的靶点提供充分的临床前依据。研究方法:1.通过RT-qPCR、Western blot、免疫组化方法,研究YAP1在胃癌中的表达水平及与胃癌预后相关关系;2.通过慢病毒的方法建立YAP1稳定过表达胃癌细胞株,构建裸鼠皮下瘤模型,体内验证YAP1对胃癌增殖能力及5-Fu化疗抵抗能力的影响;3.通过免疫组化、免疫荧光、RT-qPCR以及葡萄糖/乳酸检测方法,研究YAP1对巨噬细胞表型和糖代谢的影响;4.通过CO-IP、Western blot、免疫荧光、及生物信息学方法,研究胃癌细胞YAP1与巨噬细胞表面GLUT3的相互作用关系;5.通过瞬时转染GLUT3质粒、RT-qPCR方法,探讨GLUT3在巨噬细胞中对表型、糖代谢影响;6.通过RT-qPCR、生物信息学方法,检测巨噬细胞中细胞因子的表达情况;7.通过CCK8、划痕实验研究CCL8在体外对胃癌细胞的增殖、侵袭能力的影响,并利用生物信息学、Western blot方法筛选并验证CCL8激活胃癌细胞内的信号通路;8.通过MTT方法体外检测胃癌细胞YAP1过表达、巨噬细胞GLUT3过表达以及CCL8对胃癌细胞5-Fu的化疗抵抗作用的影响。研究结果:1.YAP1高表达与胃癌患者不良预后呈正相关关系;2.YAP1高表达与M2型巨噬细胞浸润相关;3.YAP1可通过促进巨噬细胞表面GLUT3表达增高促进巨噬细胞糖代谢;4.GLUT3依赖的巨噬细胞通过分泌CCL8激活胃癌细胞JAK1/STAT3信号通路从而促进对5-Fu的化疗抵抗。