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目的:主要研究电针“肝俞”穴对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠行为方面及肾中生物钟基因表达的影响。通过针刺“肝俞”穴,观察小鼠昼夜行为的改变,研究针刺“肝俞”穴对外周生物钟肾内特定节律基因表达的影响,进而从基因层面探讨针刺“肝俞”穴对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠的作用机制。方法:将72只C57BL/6J小鼠采取随机分组的方式,平均分成四组,分别为空白组、模型组、针刺非经非穴组和针刺肝俞组,每组18只。在光照同步(L:D=12;12,Light:08:00-20:00 Dark:20:08:00)驯化7天后,将模型组、针刺非经非穴组和针刺肝俞组小鼠,采用短时间剥夺睡眠法(L:D=2:2),造模5天,造模成功,获得无昼夜节律模型,之后恢复光照同步(L:D=12;12)。空白组全程采用光照同步方式。在造模成功后,即实验第13天,空白组与模型组在每天15:00进行捆绑20分钟,余两组在每天15:00进行针刺20分钟,连续进行5天,针刺组在双侧“肝俞”穴进行毫针针刺,非经非穴组选择小鼠腹部固定的非穴位点进行毫针针刺,针刺方法均为斜向内下方刺入0.5cm,两只针柄分别连接KWD-808I脉冲电针仪的输出导线上,将电针仪参数调整为:疏密波4/20Hz;疏密周期为6秒,至针刺部位肌肉或者下肢微微抽动即可,在最后一次针刺11小时后,即第18天02:00开始,四组同时进行,每组各处死三只取肾脏,每隔4小时,处死一批,直到第18天22:00,处死最后一批,全程用360智能红外线摄像机实时远程记录观察,并对实验过程中小鼠自发站立和活动次数进行记录,应用Real-Time-PCR法测量肾脏内Cry1和Cry2基因m RNA含量和运用Western Blot法测定Cry1和Cry2的蛋白表达量。运用余弦分析法和统计学分析验证基因表达是否具有节律性。结果:1.在360摄像机远程观察记录下,模型组、非经非穴组小鼠在实验后期与起初驯化期相比,表现出狂躁、易惊、大便不规律、质稀、皮毛暗淡等特性,站立、捋毛、攀爬次数明显增多,可听到笼内明显响声,抓取时反抗明显。而针刺组在针刺肝俞穴五天后,已恢复昼伏夜出特性,性情较温顺,站立、捋毛等行为与空白组类似,皮毛柔顺、大便较正常。运用统计学分析,在治疗后,在小鼠5min内的自发活动次数与站立次数方面,针刺组与空白组比较,非经非穴组与模型组比较,结果均无统计学意义(P>0.05)。而针刺组与模型组比较,针刺组与非经非穴组比较,活动与站立次数明显减少,有统计学意义(P<0.05)。2.在Real-Time-PCR法测量下,空白组、针刺组小鼠Cry1与Cry2基因表达呈现出节律性(P<0.3),模型组、非经非穴组小鼠Cry1与Cry2基因表达未体现节律性(P>0.3)。3.Western Blot蛋白检测发现,模型组与空白组相比,数值差异有统计学意义(P<0.05),显示模型组基因蛋白表达不具有节律性。针刺组与模型组相比,数值差异有统计学意义(P<0.05),显示针刺组基因蛋白表达具有节律性,非经非穴组与针刺组相比,差异有统计学意义(P<0.05),显示非经非穴组基因表达未呈现节律性。结论:1.正常C57BL/6J小鼠行为学方面和肾内Cry1与Cry2基因表达具备节律性。2.针刺肝俞穴有助于小鼠行为恢复正常,而针刺非经非穴则无此作用。3.针刺肝俞穴助于节律基因Cry1与Cry2在肾内表达基本恢复正常,具有节律性,已紊乱的昼夜节律周期逐渐恢复正常。而针刺非经非穴则未体现出该作用。