论文部分内容阅读
刺梨是一种贵州地方特色水果,富含多种营养功能成分。多酚、黄酮类物质作为刺梨活性成分中主要的一种降糖因子,相关研究的报道还较少。目前,世界上大约有4%的人口患有2型糖尿病（ty Pe 2 diabetes mellitus,T2DM）,而现有的治疗T2DM的降糖药有昏迷、肝肾功能损伤、恶心呕吐、腹泻、局部皮肤过敏等副作用,因此,研究来自植物的天然、无毒性降血糖成分是目前的研究热点。本文通过提取和纯化刺梨中的多酚、黄酮类化合物和多糖类化合物,比较两种功能成分的降血糖活性大小;建立了一种色谱分离方法用于刺梨总多酚化合物中4种主要成分（isolated Rosa roxburghii Poly Phenol,IRP 1-4）的分离,并对IRP 1-4进行定性分析和α-淀粉酶抑制活性研究;最后,对IRP 1-4的体内降血糖活性和具体作用通路进行研究。以上研究旨在探明刺梨中富含的多酚、黄酮类物质的分离方法、降血糖活性和作用机制。为刺梨资源的深度利用和功能性产品开发提供理论支撑,主要研究及结果如下:1.刺梨及其活性成分对T2DM小鼠糖脂代谢的影响以刺梨冻干粉（Rosa roxburghii Tratt,RRT）、刺梨多糖类提取物（Rosa roxburghii Polysaccharide,RPS）、刺梨多酚类提取物（Rosa roxburghii flavonoid,RF）为研究对象。采用高脂高糖饲料联合链脲佐菌素建立T2DM小鼠模型,干预28 d后,测定糖脂代谢相关指标。结果表明,与模型组比,阳性组、RRT组、RPS组、RF组进食量、饮水量、脏器指数、白色脂肪含量、空腹血糖值明显下降,体重、棕色脂肪含量明显上升,血清胆固醇、甘油三酯、低密度胆固醇水平明显下降,高密度胆固醇水平明显上升;肝脏丙二醛、脂肪分化因子水平明显下降,过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、葡萄糖激酶活性和肝糖原含量明显增加,肝脏病理损伤明显改善。且RF与阳性药物干预效果最相近。RPS组、RRT组的干预效果相比阳性组和RF组依次降低。因此,RF可作为一种降血糖功能成分进一步深入研究。2.刺梨多酚黄酮类纯化物分离、结构鉴定及其活性研究采用溶剂萃取法进一步纯化RF得到富含多酚、黄酮类物质的纯化物（Rosa roxburghii Poly Phenol,RP）。通过高效液相色谱法筛选溶剂系统,并采用高速逆流色谱法从RP中成功分离出4种主要成分（IRP 1-4）,采用标准品比对法和液质联用法对IRP 1-4进行定性分析。结果表明,以正己烷-乙酸乙酯-已醇-水（1:20:1:20 v/v）作为溶剂系统为最佳分离体系,在该体系下进行HSCCC分离可得到三种组分（IRP 1-3）,纯度依次为80%、89%和91%。通过反接正转法得到第4种组分（IRP-4）,纯度为63%。经定性分析,IRP 1-4依次可能为:鞣花单宁、绿原酸、槲皮苷和鞣花酸。IRP 1-3均表现出了良好的α-淀粉酶抑制活性,其中IRP-1与阳性药物抑制效果最接近。IRP 1-3的抑制活性均显著高于RP（p＜0.05）。因此,可进一步研究IRP 1-4的体内降血糖活性和作用通路。3.RP和IRP 1-4的体内降血糖活性和机理研究通过口服RP和IRP 1-4进行干预治疗,采用酶联免疫技术、实时荧光定量聚合酶链式反应技术和蛋白免疫印迹技术等研究其对T2DM小鼠的降血糖活性和作用机制。结果表明,与模型组比,RP和IRP 1-4能够显著降低T2DM小鼠的空腹血糖值、血清胰岛素水平、葡萄糖耐受异常、胰岛素抵抗指数;改善氧化应激、脂肪肥大和肝脏病理损伤。在基因和蛋白水平上,RP和IRP 1-4能增加糖原合成酶激酶蛋白的磷酸化和糖原合成酶的活性及其m RNA水平的表达,从而增加糖原含量;还能明显降低糖异生途径激活酶的活性及其m RNA水平的表达。此外,IRP-1,IRP-2,IRP-4显著增加了胰岛素抵抗通路中的关键因子磷脂酰肌醇3-激酶的表达,并促进蛋白激酶B的磷酸化,进一步抑制了血糖上升因子的表达。IRP-3和IRP-4对该通路的关键因子影响较小,但表现出良好的降血糖活性,可能是激活了其它的信号通路,需要深入研究。与阳性组比,高剂量RP组、IRP 1-4组降血糖效果均较为相近;其中,IRP-1、IRP-2和IRP-4改善效果略优于阳性,且明显优于IRP-3。因此,RP和IRP 1-4可用作降血糖药物辅助产品用于缓解T2DM症状。