产酯酶菌株的筛选及其性质研究

来源 :河北科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:boguiyu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
酯酶(Esterase,EC3.1.1.1)是一类重要的生物催化剂,是指能够催化水解羧酸酯的所有酶的总称。塑化剂,是在塑料加工中添加的一种高分子助剂,其中柠檬酸酯类塑化剂是世界公认的环保型增塑剂。目前柠檬酸酯类塑化剂的生产都是通过化学合成完成的,鉴于酯酶具有水相分解,有机相催化合成的功效,因此探索酶法合成柠檬酸酯类塑化剂的途径,是绿色生物技术的研究方向之一。本研究以柠檬酸酯类塑化剂为唯一碳源,以添加溴甲酚紫指示剂的摇瓶的变色时间越短酯酶活性越高作为初筛依据,定向富集土壤样品,筛选出一株形态杆状,革兰氏染色阴性,无芽孢的细菌,经16S rDNA分子生物学测序分析,该菌株与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的基因序列一致性达到99%,因此命名该菌株为嗜麦芽寡养单胞菌SF-H(Stenotrophomonas maltophilia SF-H,缩写为S.mal SF-H)。以SF-H菌株为出发菌株,经等离子诱变,获得了一株比对照菌酯酶活性高出20%的突变株S.mal SF-H1。对菌株S.mal SF-H1的发酵条件进行了优化,培养基成分为(L):麦芽糖30.0 g,蛋白胨5.0 g,酵母粉2.5 g,(NH4)2SO4 4.0 g,KH2PO4 1.0 g,MgSO4·7H2O 1.0 g,NaCl 0.5 g,Fe2+1.0 mg,Zn2+1.0 mg,Mn2+0.5 mg,Cu2+0.5 mg,无菌GF(1 mL/400 mL),诱导剂柠檬酸三丁酯(LM30)5.0 g,初始pH 7.0;在30℃,180 r/min,摇瓶培养30 h,菌株S.mal SF-H1酯酶活性达到最大。对菌株S.mal SF-H1产生的酯酶性质做了较详细的研究,结果表明:该酯酶对短链酯类的水解活性明显高于长链酯类,有明显底物特异性;以对硝基苯乙酸酯为底物时,酶液表现出良好的耐温性,最适温度为80℃,70℃保温2 h酶活性依然保存95%,最适pH 9.0,在pH 8.0稳定性最好,酯酶在体积分数在66%的丁醇和66%乙醇中,酶活损失较多,残留酶活约60%。鉴于菌株S.mal SF-H1酯酶具有较好的热稳定性,60℃真空旋转蒸发浓缩5倍,残存总酶活力是浓缩前总酶活力的97%以上,说明酯酶稳定性良好。为了增加酶的使用效率,也为将来在有机相应用酯酶催化合成,本研究首次选用沉淀吸附剂对酶浓缩液中的酯酶进行了固定化。结果表明可以将发酵液中的55.4%的酯酶充分固定,固定化酶30天内经多次催化反应后,依然可以保持85%的水解活性,为实际应用奠定了理论基础。
其他文献
本文以我国A股上市民营房地产企业首单储架式长租类REITs——中信证券-阳光城长租公寓1号资产支持专项计划为案例进行分析,这是深圳证券交易所积极响应国家政策号召,推动租赁住房市场发展,践行促进金融服务实体经济的重大命题,促进住房租赁资产证券化的又一创新尝试。首先,文章从目前我国房地产市场高存量库存的发展状况、国内“两房转化”的政策支持、以及租赁住房市场的供需现状三个方面进行论证,认为长租公寓的发展
新中国的成立和云南的解放,不仅惊醒了云岭高原沉睡的旧梦,开辟了云南历史的新纪元,也开辟了云南社会主义戏剧文学的新时代。云南多民族的社会主义戏剧文学,是我国传统戏曲文
页岩油藏的低采收率和巨大的页岩油储量激发了我们努力研究增强油采方法在页岩油藏中的应用。最近的数值研究表明,循环注气可以是提高页岩油储层采收率的有效方法,可以缓解气
根据国情和教育现状我国于2000年拉开了课程改革的序幕,2011年教育部正式颁布《义务教育历史课程标准(2011版)》。依据历史课程的特点和义务教育历史教学呈现的问题,国家历史教研组提出历史课程资源开发与运用的建议,呼吁教育各界加大对历史课程资源的开发运用。历史课程资源按照空间分布的特点,分为校内课程资源和校外课程资源。家庭课程资源是校外课程资源的组成部分之一,相较其他校外课程资源有其优势和独特性
变革传统的教育教学观念及学生的学习模式,以学生的发展为本,采取"探究学习",切实提高学生参与学习和体验学习的程度,在课堂教学中真正体现学生的主体性.从实践的层面上结合
<正>2001年,教育部颁发了《基础教育课程改革纲要(试行)》等一系列政策文件,正式启动了新一轮基础教育课程改革(以下简称"新课改")。改革伊始,人们对新课改的态度就有肯定、
本文以光复后1945年至1949年间的中韩附逆反思小说为研究对象,运用比较文学主题学及后殖民主义批评理论,试图阐明中韩作家针对自身在日帝时期的附逆行径如何展开辩解策略,解