【摘 要】
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C型钠肽(c-type natriuretic peptide,CNP)是钠肽家族成员之一,研究表明,CNP体外在维持牛卵母细胞减数分裂阻滞的同时,提高了卵母细胞发育能力,但具体机制尚不清楚。基于此,
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C型钠肽(c-type natriuretic peptide,CNP)是钠肽家族成员之一,研究表明,CNP体外在维持牛卵母细胞减数分裂阻滞的同时,提高了卵母细胞发育能力,但具体机制尚不清楚。基于此,本文研究调查了 CNP对牛卵母细胞和卵丘颗粒细胞线粒体生物合成与功能的影响,为理解CNP提高牛卵母细胞发育潜能的机制提供新的研究思路。本研究采集牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexs,COCs),将其在未添加(Control pre-IVM)或添加CNP(CNP pre-IVM)的前成熟液中处理6h,然后进行常规体外成熟24h,同时将未前处理的COCs直接进行体外成熟作为对照(Control no pre-IVM)。分别采用JC-1、Mito-Green、ROS试剂盒、qPCR和免疫荧光试验方法检测膜电位、线粒体分布及密度、活性氧、抗氧化因子、生物合成关键因子、线粒体编码蛋白基因基因、核编码蛋白基因和SIRT1蛋白基因。试验结果表明,相对于未成熟对照(Control no pre-IVM)和未添加 CNP(Control pre-IVM)的前成熟处理,CNP前成熟处理(CNP pre-IVM)牛COCs,在体外成熟Oh显著提高了牛卵母细胞线粒体半延伸分布的比例,体外成熟24 h显著提高了牛卵母细胞线粒体均匀分布的比例(P<0.05),而且还显著提高了牛卵丘细胞和卵母细胞线粒体膜电位和线粒体密度(P<0.05),进而增强线粒体功能;显著提高了线粒体生物合成关键调控因子、核基因组编码和线粒体基因组编码的线粒体蛋白基因及SIRT1基因的表达(P<0.05),通过影响相关基因的表达调控线粒体的生物合成;显著提高了抗氧化基因的表达(P<0.05),显著降低了活性氧水平(P<0.05),进而激活线粒体的抗氧化功能。综上所述,CNP前成熟处理不仅增强了牛卵母细胞和卵丘颗粒细胞线粒体的生物合成和功能,而且提高了抗氧化功能。
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