碱中毒通过损伤皮质GABA能神经元诱发大脑功能异常

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目的:采用膜片钳全细胞记录方法,研究碱中毒对大脑皮质GABA能神经元的突触传递及内在属性等方面的影响,探讨碱中毒引起大脑功能障碍的机制。  方法:选择出生后17-22天FVB-Tg转基因小鼠的大脑做厚度为400μm冠状脑切片,通过改变人工脑脊液灌注溶液的PH值,将实验对象分为碱中毒组(PH值8.0)和对照组(PH值7.35),两组溶液其余成分完全相同。脑片在灌注液中25℃下孵育2小时,孵育好的脑片转移到31℃通混合氧气的人工脑脊液记录浴槽(Warner RC-26G)中,使用DIC光学显微镜选择大脑皮层的Ⅱ-Ⅲ层GABA能神经元,运用AxoPatch200 B放大器,在全细胞模式下记录并分析GABA能神经元对兴奋性突触传递的反应能力以及其内在属性(包括阈电位、绝对不应期),评估GABA能神经元功能。电压钳全细胞模式下,在刺激和不刺激突触前膜情况下,记录GABA能神经元对于兴奋性突触输入的反应。我们通过改变所注入的去极化脉冲强度和持续时间刺激GABA能神经元,与去极化脉冲相对应的峰值大小被用来评估神经元从兴奋性输入向峰值转化的能力。  结果:1.相对于对照组,碱中毒组的诱发性兴奋性突触后电流发生明显的减弱(p<0.01;n=15);碱中毒组自发性的兴奋性突触后电流的频率和振幅均减弱。2.碱中毒降低了皮质GABA能神经元的峰值编码的能力,在相同的去极化强度条件下诱发峰值,在对照组和碱中毒组有统计学差异(p<0.01,n=12),表明碱中毒使皮质GABA能神经元顺序峰值的能力编码受到了损害。3.阈电位峰值在对照组分别是24.55±0.69,25.55±0.87,27.1±0.8,27.44±0.75和28.38±0.83毫伏,碱中毒组分别是28.26±0.78,30±0.9,32.18±0.8232.64±0.7和33.42±0.74毫伏,两组间有统计学差异(p<0.01,n=15),碱中毒升高了皮质GABA能神经元产生顺序峰值的阂电位;绝对不应期在对照组和碱中毒组分别是4.14±0.07和5.1±0.07毫秒,两组间有统计学差异(P<0.01,n=15),碱中毒延长了皮质GABA能神经元产生顺序峰值的绝对不应期。  结论:1、碱中毒损害了皮质GABA能神经元兴奋性突触传递的能力;2、碱中毒降低皮质GABA能神经元动作电位的编码峰值的能力;3、碱中毒使皮质GABA能神经元动作电位的阈电位升高和绝对不应期延长。
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