随着围生医学的发展和窒息新法复苏技术的普及，窒息新生儿的存活率较前有了明显提高，对窒息并发症的防治也逐渐成为近年来研究的热点，如缺氧缺血性脑病、颅内出血、肾脏损害等。既往的研究结果提示新生儿窒息后机体的免疫功能明显受抑制，窒息新生儿发生肺炎、败血症的几率也比较高。因而进一步研究窒息对免疫功能的影响，提高窒息新生儿的免疫力，对提高新生儿的存活率和改善新生儿的健康状况有着重要意义。目前，窒息所致新生儿免疫功能异常的机制尚不完全明确，一些研究结果表明，窒息可导致细胞免疫、体液免疫和红细胞免疫功能下降，窒息后神经内分泌系统的异常也可影响机体的免疫功能。既往的研究多集中在特异性免疫方面，对于在新生儿期发挥主要作用的非特异性免疫则研究较少。在呼吸系统的局部免疫防御方面，β-防御素-2(RBD-2)和肺表面活性物质结合蛋白A(SP-A)具有非常重要的意义，窒息是否对肺脏的局部免疫存在影响，以及影响的作用机制如何，目前关于此方面的报道还比较少。 本实验采用常压低浓度氧通气建立窒息新生大鼠模型，观察该模型大鼠肺组织的病理改变及肺组织中RBD-2 mRNA、SP-A mRNA的动态变化，探讨窒息对肺组织免疫防御功能的影响，以及核转录因子-κB(NF-κB)在RBD-2、SP-A基因表达中的作用，旨在为今后外源性补充RBD-2、SP-A或干预信号转导通路以调节体内RBD-2、SP-A含量提供理论依据和实践方向。 材料与方法 1．研究对象：健康清洁级1日龄新生SD大鼠96只，雌雄不限，体重(5.5g-7.0g)，随机分为对照组、窒息组、窒息+PDTC组，每组32只。 2．动物模型：窒息组、窒息+PDTC组新生鼠放入密闭缺氧箱内，通入含7％O<,2>、93％N<,2>的混合气体，钠石灰吸收二氧化碳，温度、湿度恒定。通气2h后，将新生鼠放出，恢复正常通气于自然空气中。对照组、窒息组窒息前1h腹腔内注射生理盐水(20ml/kg)，窒息+PDTC组窒息前1h腹腔内注射PDTC(200mg/kg)。 3．标本采集及处理：每组新生鼠分别于复氧后3h、24h、72h、120h处死，取左肺置于10％福尔马林中固定，制备石蜡切片；右肺置于液氮中，转运至-80℃冰箱保存待测。 4．实验方法及检测指标：石蜡切片HE染色光镜下观察肺组织病理形态学变化； SABC法免疫组化检测肺组织中NF-κBp65的表达；RT-PCR法测定RBD-2 mRNA、SP-AmRNA的表达水平。 结果 1．窒息对新生鼠一般状况的影响新生鼠置于缺氧箱内后，逐渐出现呼吸加快、皮肤苍白和不同程度的发绀，窒息早期新生鼠的自主活动增多，随窒息时间延长自主活动逐渐减少，个别出现四肢抽动，这些改变出现的时间和表现程度存在个体差异，在恢复供氧后，上述现象基本缓解，但窒息新生鼠仍表现出活动少、反应差、体重增长缓慢等。而对照组则活动好、反应灵敏，无以上异常表现。 2．肺组织的病理改变对照组出生后肺泡上皮逐渐发育成熟，肺间质逐渐减少，肺泡逐渐增多，肺泡体积也逐渐增大，而且肺泡大小均匀一致。窒息组3h可见肺间质稍肿胀，肺泡内有少量散在的红细胞；24h可见肺间质水肿，肺小血管扩张、充血，有的区域呈片状出血，肺泡腔内炎性细胞渗出等病理变化；72h，120h上述变化逐渐好转，但肺间质增厚，肺泡体积较小，肺泡大小不均匀。窒，~,+PDTC处理组较窒息组各时间点的病理变化稍减轻，但仍可见间质水肿、炎性细胞浸润等变化。 3．肺组织NF-κBp65表达水平的动态变化免疫组化染色显示NF-κBp65蛋白在对照组新生鼠肺组织呈阴性或弱阳性反应，偶见胞核着色。窒息组与对照组相比，多个时间点呈阳性反应，阳性反应产物不仅分布于阳性细胞的胞浆中，细胞核也呈阳性反应，表达分布更广泛。NF-κBp65蛋白在各时间点的表达水平不同：3h，24h，72h NF-κBp65蛋白表达阳性率为分别为(11.78±3.00)％、(9.83±2.59)％、(8.85±2.80)％，高于对照组的(4.65±2.88)％、(5.70±2.05)％、(5.95±2.12)％，且差异均有统计学意义(p<0.05)，120h NF-κBp65蛋白表达阳性率为(7.70±3.05)％，高于对照组的(6.23±2.57)％，但差异没有统计学意义(p>0.05)，其中3h表达水平最高，其次为24h。窒息+PDTC组在3h，24h NF-κBp65蛋白表达阳性率为(8.20±2.96)％、(6.85±2.25)％，均明显低于窒息组(p<0.05)，72h，120hNF-κBp65蛋白表达阳性率为(6.68±2.54)％、(6.45±3.12)％，低于窒息组，但差异没有统计学意义(p>0.05)，其中3h表达水平最高，其次为24h。 4．肺组织RBD-2 mRNA表达水平的动态变化窒息组肺组织3h RBD-2 mRNA的表达水平为(1.37±0.26)，高于对照组的(0.72±0.21)(p<0.05)，24h，72 h，120h RBD-2 mRNA的水平逐渐下降，72 h，120h分别为(0.81±0.24)、(0.80±0.31)，均低于对照组相应时间点的(1.10±0.35)、(1.12±0.43)，差异均有统计学意义(p<0.05)。窒息+PDTC组3h，24h，72h，120h RBD-2 mRNA表达水平分别为(1.08±0.29)、 (0.68±0.19)、(0.52±0.16)、(0.47±0.20)，低于窒息组相应时间点，差异均有统计学意义(p<0.05)。在窒息组和窒息+PDTC组，RBD-2 mRNA表达与NF-κBp65之间的相关系数r=0.595，具有统计学意义(p<0.01)。 5．肺组织SP-A mRNA表达水平的动态变化窒息组3h，24h，72h，120h SP-A mRNA的表达水平分别为(0.62±0.26)、 (0.68±0.17)、(0.82±0.30)、(0.92±0.23)，均低于对照组相应时间点的 (0.98±0.38)、(1.04±0.34)、(1.20±0.38)、(1.39±0.38)，差异均有统计学意义(p<0.05)。窒息+PDTC组3h，24h，72h，120h SP-A mRNA表达水平为(0.59±0.31)、(0.62±0.41)、(0.81±0.37)、(0.86±0.46)均低于窒息组，但差异没有统计学意义(p>0.05)。在窒息组和窒息+PDTC组，SP-A mRNA、NF-κBp65之间的相关系数为r=0.252，具有统计学意义(p<0.05)。 结论： 1．本实验建立的新生鼠窒息模型是成功的，窒息可造成新生鼠肺组织的病理损伤，抗氧化剂PDTC可以减轻窒息引起的肺组织病理损伤； 2．窒息可引起新生鼠肺组织NF-κB活化，随复氧时间延长，NF-κB活化逐渐减弱，PDTC可以明显抑制窒息引起的NF-κB的活化； 3．窒息新生鼠肺组织中的RBD-2 mRNA在窒息后早期较对照组表达增加，随复氧时间延长，RBD-2 mRNA的表达逐渐减少，并低于对照组，提示窒息可引起肺组织免疫防御功能下降；RBD-2 mRNA表达量与NF-κBp65蛋白量有强相关性，提示NF-κB介导的转录可能是RBD-2 mRNA表达的调控机制； 4．窒息新生鼠肺组织中的SP-AmRNA在窒息后表达低于对照组，提示窒息可引起SP-AmRNA表达减少，从而使肺组织呼吸功能与免疫防御功能下降；SP-AmRNA表达量与NF-κBp65蛋白量有相关性，提示NF-κB参与了SP-AmRNA的表达调控。