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粪肠球菌Enterococcus faecalis)是人、动物等肠道内生存的正常的微生物菌群；然而,在多数的临床分离菌中普遍存在有致病岛(PAIs),且与健康肠道分离菌株有非常大的差异。研究表明多数的毒力基因与抗药基因可能由可移动元件携带,如何抑制这些移动元件的水平转移成为当前首要任务。聚集规律间隔的短回文重复序列(CRISPR位点)是在细菌长期的进化和适应过程中所形成的,作为抵御外源基因入侵的一种自我保护机制。主要是利用CRISPR/Cas系统所形组成的免疫体系,产生针对噬菌体、质粒等外源DNA的抑制作用,迫使致病基因及抗药基因转移失败,从而保护宿主基因组的完整性。本实验研究CRISPR/cas基因在大肠杆菌中的功能完整性,即其对外源DNA的抑制作用。通过特异性PCR扩增,发现在本实验室保存的42株临床分离E.faecalis中有11.90%的菌株含有完整的CRISPR/cas基因。经过测序分析发现此片段共有7919bp,其中相邻的四个cas基因与对应序列同源性达99.4%,并在重复区发现有13个间区序列存在,且重复序列具有明显的颈环结构,而L序列相对于参考序列则有一个碱基突变,表明其在种内相对保守。应用试验中所构建重组质粒pCRISPRl转化E.coli感受态细胞；稍后,用间区重组质粒pET28-S1转化重组菌,发现存在CRISPR/cas基因的E.coli细胞能够很好的限制pET28-S1质粒的进入,这表明CRISPR/cas基因在大肠杆菌中能够抑制外源质粒DNA。通过噬菌体Ph.D.-7TM侵染重组大肠杆菌pCRISPRl-ER2738,经过丝裂霉素C和紫外线诱导筛选可能形成抗噬菌体菌株。测序比对序列后表明,在重组ER2738菌株的CRISPR位点中未见插入新DR-S序列。