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本试验从屠宰场废弃的牛卵巢表面抽取直径在2～6mm的卵泡的卵泡液，并从卵泡液中分拣出外被多层卵丘细胞的卵丘卵母细胞复合体(COCs)，直接对COCs或者体外成熟培养后的卵母细胞采用不同的玻璃化冷冻方法进行冷冻保存，然后利用体外受精(IVF)和胞浆内单精子注射(ICSI)两种方法对玻璃化冷冻卵母细胞的受精能力进行了比较研究，旨在建立能够进一步提高牛冷冻卵母细胞受精能力的改进方案，使卵母细胞冷冻技术上升到与胚胎冷冻同样成熟的水平。 1 减轻损伤方案对冷冻卵母细胞IVF的影响 使用选择合适时期的卵母细胞进行冷冻；采用最小样本量玻璃化冷冻方法进行冷冻；在解冻后先孵育再进行体外受精等三种方案能够部分维持或恢复冷冻牛卵母细胞IVF受精能力。选择成熟培养的卵母细胞进行冷冻，其卵裂率显著高于直接冷冻的卵泡卵母细胞(GMP组P＜0.01(19.5％vs 11.6％)，straw组P＜0.05(17.6％vs 10.3％))。选择GMP法作为冷冻方法，其与straw法相比，前者冷冻的卵泡卵母细胞(11.6％vs10.3％)和成熟卵母细胞(19.5％vs 17.6％)的卵裂率均优于后者，但无统计学差异(P＞0.05)．选择解冻后孵育1h和3h组，其受精率显著高于对照组(P＜0.05)，孵育1h、2h、3h组之间受精率无显著差异(P＞0.05)，同样，它们之间的卵裂率也无统计学上的差异(P＞0.05)，但在数值上呈现递减趋势，并且都比对照组要高，但也无显著差异(P＞0.05)。 2 直接穿透透明带的ICSI技术探讨 在ICSI方面的研究结果表明，选择DTT进行受精前精子处理得到的受精率和卵裂效果优于其它各组，与对照组差异显著(P＜0.05)，与其它两个添加组差异不显著(P＞0.05)，而对应的冷冻卵母细胞IVF前精子处理结果表明，肝素组的受精率和卵裂率显著高于咖啡因组(P＜0.05)和对照组(P＜0.01)，但与DTT组无统计学差异(P＞0.05)．由于本试验是针对受精能力的研究，因此要尽量排除孤雌胚的影响，通过对受精卵母细胞进行筛选，在一定程度上减少了由于激活处理而导致的大量孤雌胚对卵裂率的干扰，但也因此使ICSI的卵裂率均低于IVF中的对应处理组。另外，不同注射方法的研究表明，电压和气压法的卵裂率显著高于油压法(P＜0.05)，电压法效果最好，但与气压法无统计学差异(P＞0.05)。