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目的甲状腺癌是常见的内分泌系统肿瘤,近年呈现逐渐上升的趋势,特别是未分化型甲状腺癌预后较差、易转移,分化型甲状腺癌有部分患者亦出现诸多后遗症。甲状腺癌的分子机制还未完全明晰,对一部分甲状腺癌还不能早期诊断。研究发现,端粒酶在部分甲状腺癌肿瘤组织中高表达,端粒酶逆转录酶（Telomerase reverse transcriptase,TERT）是端粒酶的主要功能单位。据报道TERT启动子突变以及甲基化等与端粒酶激活相关,其参与甲状腺癌的分子机制并不清楚,本实验试图寻找调节突变TERT启动子的转录因子,研究其调节端粒酶的效应;从表观遗传学研究TERT启动子甲基化与TERT表达的关系;从宏观上研究与TERT表达的相关蛋白。通过以上研究以更好的揭示TERT参与甲状腺癌的分子机制,为甲状腺癌的诊断寻找分子标志物,为甲状腺癌的治疗寻找治疗靶点。方法1.收集临床标本,推片确诊为甲状腺癌,提取组织RNA,逆转录,实时荧光定量PCR测定TERT阳性和阴性。提取组织DNA,PCR扩增启动子,进行测序,寻找TERT启动子点突变。通过生物信息学分析,预测与点突变启动子结合的转录因子。转染转录因子干扰RNA和其表达载体,实时荧光定量PCR测定TERT m RNA和端粒酶活性试剂盒测定端粒酶活性,以探索转录因子对启动子突变TERT表达及对端粒酶的影响。2.临床标本中按上法筛选TERT表达阳性组和TERT表达阴性组,通过生物信息学技术预测TERT启动子甲基化位点,设计引物,提取DNA,通过亚硫酸铵盐扩增子测序法测定甲基化程度,分析甲基化与TERT表达的关系。3.临床标本中按上法筛选TERT表达阳性组和TERT表达阴性组,提取总蛋白,以Label-free法筛选差异表达的蛋白,通过质谱鉴定差异表达的蛋白,对差异表达的蛋白统计分析,通过生物信息学分析其功能。结果1.从甲状腺癌组织中发现TERT表达阳性组25例和TERT表达阴性组26例。TERT表达阳性组有7例TERT启动子发生C228T、C250T点突变。预测与C228T、C250T点突变启动子结合的转录因子GA结合蛋白Factor转录因子α蛋白（GA Binding Protein Transcription Subunit Alpha Protein,GABPA）。转染GABPA干扰RNA,TERT m RNA表达降低（P<0.5）,端粒酶活性降低（P<0.5）;转染其表达载体后,TERT m RNA表达升高（P<0.5）,端粒酶活性升高（P<0.5）。2.对25例TERT表达阳性和26例TERT表达阴性甲状腺癌组织进行甲基化水平检测,TERT表达阳性组TERT启动子甲基化水平显著高于TERT表达阴性组TERT启动子甲基化水平（P<0.5）。3.对9例TERT表达阳性和9例TERT表达阴性甲状腺癌组织的蛋白表达水平检测,筛选出TERT表达阳性组和TERT表达阴性组差异表达蛋白（P<0.5）有121个,上调的蛋白有56个,下调的蛋白有65个,上调的蛋白包括癌蛋白、炎症蛋白、免疫分子、酶蛋白以及未知功能的蛋白等,下调的蛋白包括抑癌蛋白、转移抑制蛋白、炎症蛋白以及未知功能的蛋白等。结论1.转录因子GABPA能调节启动子突变的TERT转录,调节端粒酶活性,并通过调节端粒酶活性,可能参与甲状腺癌的发生和发展。2.甲基化水平低,TERT的表达低,甲基化水平高,TERT表达水平高。TERT启动子甲基化参与TERT的表达调节,TERT启动子甲基化可能参与甲状腺癌的发生发展过程。3.筛选出的TERT表达阳性组和TERT阴性组差异表达蛋白,其中癌蛋白的表达升高、抑癌蛋白的表达降低可能直接或间接参与TERT的表达,从而调节端粒酶,进而影响甲状腺癌的发生发展。